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神农香菊(Chrysanthemum indicum var.aromaticum)是近年来新发现的性状十分优良的野生植物。MYB类转录因子在植物中广泛存在,对植株的抗逆性具有重要的调控作用。实验室前期在已有的神农香菊转录组数据信息的基础上,挖掘分析并克隆得到了CiMYB4基因,并采用农杆菌介导法将CiMYB4基因成功转入烟草和野菊中。为探究神农香菊MYB转录因子对植物抗旱性的调控作用,本研究以实验室前期获得的转CiMYB4基因烟草与转CiMYB4基因野菊为对象,分别观察并测定各株系植株在自然干旱胁迫下植株表型变化、酶活性等生理指标、光合指标的变化情况;同时,通过“酶切-连接”法,构建CiMYB4基因抑制表达载体,采用农杆菌介导法转入野菊中,对CiMYB4基因功能进行了初步的研究,为后期的RNAi研究以及进一步研究CiMYB4基因功能奠定基础。主要研究结果如下:1.对野生型烟草(WT)、转空载体基因烟草(EV)、转CiMYB4基因烟草(S1、S2、S3)同时进行自然干旱胁迫及复水处理。通过对各株系的表形观察、SOD酶、POD酶、CAT酶等活性、MDA含量、脯氨酸含量等生理指标和净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、胞间CO2浓度(Ci)光合指标的测定得到:相比WT、EV烟草株系,转CiMYB4基因烟草植株萎蔫干枯速度更慢,复水成活率更高;保护膜系统、调节植株体内水分能力更强;转CiMYB4基因烟草在重度干旱下,仍能进行重要的生命活动。表明转CiMYB4基因烟草比WT、EV烟草株系,具有更高的生长优势,耐旱力更强;CiMYB4基因在一定程度上增强了烟草的耐旱力。2.对野生型野菊(WT)、转空载体基因野菊(EV)、转CiMYB4基因野菊株系(A1、A2)进行同等程度的自然干旱胁迫及复水处理。通过对各株系的表型观察、SOD酶、POD酶、CAT酶等活性、MDA含量、脯氨酸含量等生理指标和净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、胞间CO2浓度(Ci)光合指标的测定得到:相比WT、EV野菊株系,转CiMYB4基因野菊植株萎蔫变黄过程更慢,复水成活率更高,调节能力更强;在重度干旱下,能保持有一定的生命活力。表明转CiMYB4基因野菊比WT、EV野菊株系,具有更高的生长优势,耐旱力更强;CiMYB4基因在一定程度上增强了野菊的耐旱力。3.基于神农香菊CiMYB4基因序列,选出长度为425bp的目的片段,在两端添加Xho1、KpnI/Xbal Ⅰ、Hind Ⅲ 酶切位点,构建克隆载体 pGEM-CiMYB4RNAi-T。对克隆载体进行双酶切,分别获得正义目的片段和反义目的片段。利用Xhol、KpnI/XbalⅠ、Hind Ⅲ双酶切,构建CiMYB4(+)/pHANNIBAL/CiMYB4(-)重组载体。利用Spe Ⅰ和Sac Ⅰ双酶切,构建pRNAi-CiMYB4植物表达载体。采用电转化法,将pRNAi-CiMYB4植物表达载体导入农杆菌EHA105中,置于-80℃冰箱中保存备用。4.壮观霉素10mg/L为转pRNAi-CiMYB4重组质粒野菊遗传转化时的叶片分化筛选的最适临界浓度;壮观霉素12mg/L为转pRNAi-CiMYB4重组质粒野菊遗传转化时生根筛选抗性苗的最适临界浓度。200mg/L为最适的头孢霉素的抑菌浓度。采用农杆菌介导法,将pRNAi-CiMYB4重组质粒转入野菊植株中,通过抗性生根筛选、抗性植株的cDNA的PCR鉴定和qRT-PCR检测,测定CiMYB4基因在抗性植株中的相对表达量,证明已成功获得1株转pRNAi-CiMYB4重组质粒阳性野菊株系。