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肠道是人体内最大的消化器官和免疫器官,因此肠道健康对人类正常生活有举足轻重的影响。炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)是指一类发生于肠道的慢性炎症,包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)两种主要类型。UC发病的具体机制目前尚不清楚,目前普遍认为这是一个多因素相互作用而导致的疾病,主要包括微生物、环境、遗传、免疫等因素。本论文主要利用小鼠结肠炎模型,探究ES2A在溃疡性结肠炎中的作用机制。我们从医院收集了 UC患者和正常人各20例的血浆和肠粘膜组织,分别用ELISA和western blot的方法检测ES2A的表达,结果发现UC患者的ES2A的表达水平分别下调了 26.5%和55.3%,提示ES2A可能在溃疡性结肠炎发病中起作用。我们利用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎模型,探究ES2A在UC中的发病机制。我们测定了过表达ES2A组、敲降ES2A组和对照组体重变化、疾病活动指数和结肠缩短程度等症状指标。结果显示,在造模第10天,与DSS对照组相比,ES2A过表达组体重下降明显较少(8.5±3.4%vs 13.4±2.8%),疾病活动指数上升明显较少(5.8± 1.7 vs 7.3±1.8),结肠缩短程度较低(结肠长度:7.1±0.4 vs 6.3±0.5 cm),敲降ES2A组体重下降明显较多(21.8±4.1%vs 13.4±2.8%),疾病活动指数上升明显较多(10.1±1.5 vs 7.3±1.8),结肠缩短更明显(结肠长度:5.8±0.3 vs 6.3±0.5 cm),说明ES2A减轻造模小鼠的症状。各组小鼠结肠组织石蜡切片和HE染色结果显示,与DSS对照组相比,过表达ES2A造模小鼠组织病理学评显著降低(3.2±0.7 vs 5.2±1.7),而敲降ES2A造模小鼠组织病理学评显著升高(7.0± 1.0 vs 5.2±1.7)。我们分别用ELISA和qPCR等方法检测各组血清和结肠组织炎症因子的表达和转录水平。结果发现,与DSS对照组相比,过表达ES2A组小鼠炎症因子水平明显降低,而敲降ES2A组小鼠的炎症因子水平显著。我们分离了各组小鼠的肠系膜淋巴结和结肠组织,并将其消化为单个细胞,通过流式细胞术检测肠系膜淋巴结(Mesenteric lymph nodes,MLN)和肠道固有层淋巴细胞(Lamina propria lymphocytes,LPL)中Treg细胞和Th17细胞的比例。结果发现与DSS诱导组相比,过表达ES2A增加炎症部位Treg细胞的比例(LPL:3.0±0.3%vs 2.5±0.3%,MLN:22.8±4.7%vs 16.7±2.3%),而敲降 ES2A 会减少 Treg 细胞的比例(LPL:2.1±0.4 vs 2.5±0.3%,MLN:13.14±2.7 vs 16.7±2.3%)。同时,过表达ES2A减少炎症部位Th17细胞的比例(LPL:11.1±2.8 vs 17.9±3.1%,MLN:6.3±1.6 vs 9.5±0.3%),而敲降 ES2A 增加 Th17 细胞的比例(LPL:23.9±2.8 vs 17.9 ± 3.1%,MLN:13.3 ±1.6 vs 9.5±0.3%)。以上结果说明 ES2A 在炎症过程中通过调节Treg细胞和Th17细胞的比例进而抑制炎症。我们还探究ES2A在TCR α-/-小鼠模型中的作用。TCR α-/-小鼠可在第20周时自发形成性结肠炎模型。第20周时我们取出正常小鼠TCR α-/-小鼠组、过表达ES2ATCR α-/-小鼠组和敲降ES2A TCR α-/-小鼠组的结肠组织,制作石蜡切片并进行HE染色。结果发现过表达ES2A的TCR α-/-小鼠与正常TCR α-/-小鼠相比组织病理学评分明显较低(3.5±0.4 vs 4.2±0.3),而ES2A敲降的TCR α-/-小鼠与正常TCR α-/-小鼠相比病理学评分明显较高(5.7±0.6 vs 4.2±0.3)。由此可见,过表达ES2A抑制TCR α-/-小鼠自发性溃疡性结肠炎的病理学损伤。我们使用IL-6分别刺激小鼠胚胎肝细胞(BNLCL.2)和人肝癌细胞(Hep G2),ELISA检测细胞上清中ES2A的表达,结果分别平均下降了 13.5%和28.4%,IL-6刺激小鼠时,血清和肝脏组织mRNA中ES2A的水平分别平均下降了 22.3%和 52.3%。上述结果表明,ES2A通过增加炎症部位Treg细胞和减少Th17细胞的比例抑制炎症,而炎症因子IL-6在炎症状态下调ES2A的表达而促进炎症发展,最终发展为溃疡性结肠炎。在另一项研究中,我们发现从菲牛蛭中分离并纯化了一个新型弹性蛋白酶抑制剂HMEI-A,并具有抑制中性粒细胞胞外杀菌网络活性,这项研究揭示了一个菲牛蛭的吸血机制,并为临床抗炎药物提供新策略。