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多囊卵巢综合症（Polycystic ovary syndrome,PCOS）是一种育龄期妇女常见的内分泌紊乱类疾病,根据目前实施的诊断标准和人群调查发现,其发病率为6-21%,约占无排卵性不育症病例的80%。主要特征为稀发排卵或无排卵,高雄激素血症和卵巢多囊样病变,主要临床表现为月经周期不规律,不孕,肥胖,血脂异常,多毛等。但目前临床上PCOS的药物治疗效果不理想,对远期并发症也缺乏合理的防治措施,因此,寻找一种安全有效的治疗PCOS的药物成为当务之急。藏红花又名番红花,属鸢尾科植物,是一种治疗原发性痛经,经前紧张等妇科疾病的传统中药。其主要成分西红花酸（Crocetin）是一种多不饱和共轭烯酸,有改善胰岛素抵抗,抗氧化应激,抗炎等多种治疗作用。目前,多项研究证明胰岛素抵抗和糖代谢异常是PCOS的发病机制之一,PCOS患者的卵巢的局部胰岛素抵抗会导致卵巢功能障碍和内分泌异常,另外,现代研究也证明炎症成为PCOS的另一个致病因素,局部炎症也会影响PCOS患者卵巢中的卵泡生长和发育。因此我们推测Crocetin可能会对PCOS患者的内分泌代谢异常和卵巢功能障碍有治疗作用。丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza的干燥根和根茎,可用于治疗月经不调,痛经经闭。中药丹参曾被用于治疗体内雄激素过高引起的痤疮和提高PCOS患者的生育能力。丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA）是丹参的主要成分之一,由于含有醌型结构,容易被氧化还原,因此可以抑制炎症和抗氧化,还具有免疫调节、治疗心血管疾病和神经保护等作用,近年来研究发现Tanshinone ⅡA作为一种植物雌激素,有望通过激素替代疗法治疗心血管疾病,因其与17β-雌二醇的化学结构相似,可以和雌激素受体结合,通过细胞外信号调节激酶通路,抑制体内的炎性反应和氧化应激,改善绝经后女性心血管疾病的病情。我们猜测丹参酮ⅡA对雌/雄激素转化有一定的影响,可能对PCOS有一定的疗效。在此本研究旨在确认Crocetin和Tanshinone ⅡA对PCOS的治疗作用并探讨其作用机制。第一部分 西红花酸治疗DHT诱导的小鼠PCOS的机制研究目的:观察Crocetin对双氢睾酮（Dihydrotestosterone,DHT）诱导的多囊卵巢综合症（Polycystic ovarian syndrome,PCOS）小鼠的疗效并探讨其作用机制。方法:给予妊娠15-18天孕鼠皮下注射DHT诱导子代雌鼠PCOS模型,皮下注射PBS作为正常对照。待子鼠8周龄后,随机选择一半数量的PCOS小鼠连续4周Crocetin灌胃,作为Crocetin给药组,另一半作为模型组。给药期间检测体重和动情周期,待小鼠16周龄左右,通过眼球取血后处死,取出下丘脑、卵巢。采用HE染色观察卵巢组织的病理改变;ELISA试剂盒检测血清中雌二醇（Estradiol,E2）、睾酮（Testosterone,T）、孕酮（Progesterone,P4）、促黄体生成素（Luteinizinghormone,LH）、卵泡刺激素（Follicle-stimulating hormone,FSH）;采用免疫组化、Western blot和实时荧光定量PCR法检测下丘脑的前腹侧视旁核（Anteroventral periventricular,AVPV）、弓状核（Arcuate,ARC）的Kisspeptin（Kp）以及视前区（Preoptic area,POA）里GnRH的表达水平;7周龄的雌鼠实施卵巢摘除手术,连续4周皮下注射E2或其溶剂（玉米油）,或联合西红花酸灌胃给药,其溶剂（0.3%NaOH溶于双蒸水）作为对照,依次作为为伪手术组、去势组、去势+Crocetin组、去势+E2组、去势+E2+Crocetin组。结果:1)与正常对照组相比,PCOS小鼠卵巢与体重的比值上升了 22.5%（P＜0.05）,动情周期延长;2)卵巢内出现大的空泡,闭锁卵泡数量增加了 138.74%（P＜0.05）,窦状卵泡、成熟窦状卵泡和黄体数量分别减少了 38.80%、56.35%（P＜0.01）和 63.77%（P＜0.05）;3)血清中 E2、P4 和 FSH 水平分别降低了 40.99%、56.91%（P＜0.05）、和 38.80%（P＜0.01）,而 T、LH 水平分别升高了 43.23%和148.46%（P＜0.05）;4)下丘脑中AVPV中Kp神经元表达减少,ARC中Kp神经元表达增多,POA中GnRH神经元减少,而以上病理改变能够被Crocetin部分逆转;5)Crocetin和E2联合给药后,去势小鼠的GnRH和AVPV中的Kiss1 mRNA 分别上升了 83.55%（P＜0.05）和 155.55%（P＜0.01）。结论:Crocetin分别通过促进和抑制下丘脑AVPV核和ARC核团的Kp表达改善PCOS的病理变化。第二部分 丹参酮ⅡA治疗E2诱导的小鼠PCOS的机制研究目的:观察Tanshinone ⅡA对雌二醇（E2）诱导的多囊卵巢综合症（PCOS）小鼠的疗效并探讨其作用机制。方法:雌性新生小鼠皮下注射E2诱发子代雌鼠PCOS模型,皮下注射PBS作为正常对照。待子鼠8周龄后,随机选择一半数量的PCOS小鼠连续4周Tanshinone ⅡA灌胃,作为Tanshinone ⅡA给药组。给药期间检测体重和动情周期,待小鼠16周龄左右,通过眼球取血后处死,取出下丘脑、卵巢。采用HE染色观察卵巢组织的病理改变;ELISA试剂盒检测血清中雌二醇（E2）、睾酮（T）、孕酮（P4）、促黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）;采用荧光定量PCR法检测卵巢FSHR、Aromatase的表达;分离出正常对照、模型和给药症的小鼠卵巢组织提取颗粒细胞,FSH处理10min后,cAMP试剂盒测量细胞内的cAMP浓度,并以荧光定量PCR和Western Blot方法检测颗粒细胞FSHR蛋白水平,以及 FSHR、Aromatase 的 mRNA 水平。结果:1)与对照组相比,PCOS小鼠卵巢与体重的比值上升了 31.54%（P＜0.05）,动情周期延长;2)卵巢内出现大的空泡,闭锁卵泡数量增加了 159.86%（P＜0.01）,成熟窦状卵泡、窦状卵泡和黄体的数量分别减少了 65.67%、58.80%和89.59%±8.56%（P＜0.01）,Tanshinone ⅡA治疗后,成熟窦状卵泡、窦状卵泡和黄体的数量分别恢复到正常水平的80.05%,61.32%和56.32%（P＜0.05）,闭锁卵泡数量下降了56.53%±9.31%（P＜0.01）,3)血清中E2和P4水平分别降低了44.74%、23.41%±3.28%（P＜0.05）,而 T、LH 和 FSH 水平无明显变化;4)模型组小鼠卵巢中FSHR和aromatase mRNA水平分别下降了 39.18%和41.62%（P＜0.05）,Tanshinone ⅡA治疗后恢复到正常水平,体外给予FSH刺激小鼠卵巢的颗粒细胞,造模组小鼠的cAMP浓度是对照组小鼠44.86%（P＜0.05）,Tanshinone ⅡA治疗后细胞内的cAMP浓度恢复到正常对照组的91.66%（P＜0.05）,模型组颗粒细胞中的FSHR和aromatasemRNA水平分别下降到40.18%（P＜0.01）和42.62%（P＜0.05）,给药组则恢复到96.31%和102.24%（P＜0.05）。结论:Tanshinone ⅡA的治疗作用可能通过上调颗粒细胞FSHR的表达水平,激活FSHR/cAMP通路,上调Aromatase的表达,异常下降的E2/T比例恢复正常,进而使得卵巢的结构和功能病变得到纠正。综上所述,本文工作主要创新之处:1.Crocetin能改善多囊卵巢综合症小鼠的动情周期紊乱,卵巢多囊样病变,异常的激素水平,同时Crocetin增加HPO轴的活性,增强AVPV中Kp神经元的Kp表达,抑制ARC中Kisspeptin神经元的Kp表达。2.Tanshinone ⅡA通过上调卵巢颗粒细胞内的FSHR和Aromatase的表达水平,一定程度上恢复PCOS小鼠的卵巢的生育能力,调节性激素的分泌,进而使得卵巢的结构和功能病变得到纠正。