【摘 要】
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目的:探讨miRNA-126介导EGFL7在人神经干细胞（NSCs）中对新生血管生成的影响以及相应机制。方法:本研究以人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）和神经干细胞（NSCs）为研究对象,构建miR-126 mimic、inhibitor重组载体,验证并转染细胞,荧光显微镜下确认细胞的转染率,随后进行以下实验:1、双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-126与EGFL7之间的关系;2、CCK-8法
【基金项目】
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海南省自然科学基金（NO.20168296）；
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目的:探讨miRNA-126介导EGFL7在人神经干细胞（NSCs）中对新生血管生成的影响以及相应机制。方法:本研究以人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）和神经干细胞（NSCs）为研究对象,构建miR-126 mimic、inhibitor重组载体,验证并转染细胞,荧光显微镜下确认细胞的转染率,随后进行以下实验:1、双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-126与EGFL7之间的关系;2、CCK-8法检测已转染载体对细胞增殖能力的影响;3、实时荧光定PCR（q RT-PCR）技术和Western Blot技术检测转染载体后细胞内miRNA-126和EGFL7的表达;4、Transwell小室技术对NSCs和HUVEC共培养,显微镜观察共培养条件下转染载体对HUVEC细胞迁移能力的影响,进一步明确转染载体对HUVEC细胞成管能力的变化;5、利用Western Blot技术检测共培养条件下载体转染前后HUVEC中PI3K/AKT通路相关蛋白表达量的变化。结果:1、成功构建了miR-126 mimic和miR-126 inhibitor重组载体并将其转染到HUVEC细胞内,荧光显微镜计算重组载体在HUVEC细胞内转染率约70%,双荧光素酶报告基因测定显示EGFL7是miRNA-126的靶基因;2、细胞增殖水平检测结果表明,转染miR-126 mimic的HUVEC较对照组细胞增殖受抑制（P<0.05）,而转染miR-126 inhibitor的HUVEC细胞较对照组细胞增殖水平升高（P<0.05）;3、q RT-PCR结果显示,miR-126 mimic组的HUVEC细胞中EGFL7基因表达较对照组明显降低（P<0.05）,miR-126的表达较其他组明显升高（P<0.05）,而miR-126 inhibitor组的HUVEC细胞中EGFL7基因的表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,miR-126的表达较其他组降低（P<0.05）;Western Blot结果显示:miR-126 mimic组中EGFL7蛋白表达较对照组减少,而miR-126 inhibitor组中EGFL7蛋白表达未受抑制;4、在共培养条件下,miR-126 mimic组中HUVEC细胞迁移水平较对照组减少,细胞成管能力较对照组减弱。而miR-126 inhibitor组细胞迁移水平较对照组增加,细胞成管能力较对照组显著增强;5、Western Blot结果显示:miR-126 mimic组中PI3K、PPI3K、AKT和P-AKT蛋白表达均减少（P<0.05）,而miR-126 inhibitor组上述通路蛋白的表达均明显增加（P<0.05）。结论:本研究表明EGFL7参与神经干细胞-血管内皮细胞共培养体系中微血管形成过程受miR-126调控,该调控过程可能通过EGFL7/PI3K/AKT信号途径进行;
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