【摘 要】
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目的:介绍一种新型的自组装纳米纤维水凝胶的制备方法,并对其负载多聚脱氧核苷酸(PDRN)的形态学、粒径、包封率、载药量、缓释性能及结构进行检测。方法:购买IKVAV、RGD、FGL-PA多肽类片段,按不同比例和不同浓度进行组合,通过层层自组装合成纳米纤维水凝胶,通过比较玻片上纳米纤维水凝胶的流动时间,确定合成纳米纤维水凝胶的最佳配比。将PDRN按不同比例加入上述混合好的多肽溶液中,用同样的方法确定
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目的:介绍一种新型的自组装纳米纤维水凝胶的制备方法,并对其负载多聚脱氧核苷酸(PDRN)的形态学、粒径、包封率、载药量、缓释性能及结构进行检测。方法:购买IKVAV、RGD、FGL-PA多肽类片段,按不同比例和不同浓度进行组合,通过层层自组装合成纳米纤维水凝胶,通过比较玻片上纳米纤维水凝胶的流动时间,确定合成纳米纤维水凝胶的最佳配比。将PDRN按不同比例加入上述混合好的多肽溶液中,用同样的方法确定纳米纤维凝胶中加入胎盘提取液的最佳浓度。通过透射电镜观察纳米纤维凝胶的形态结构,运用动态衍射检测其粒度范围,运用紫外分光光度计检测其包封率、载药量及缓释性能,运用晶体衍射仪对其晶体结构进行验证。结果:通过透射电镜证实成功合成了纳米纤维水凝胶,确定了该水凝胶原料的最佳配比:IKVAV:RGD:FGL-PA=1:1:1,最佳原料配比浓度是0.6mg/ml,水凝胶中加入PDRN的最佳比例是50%,粒度分析仪检测其粒径为212nm,符合1-1000纳米材料范围,紫外分光光度计结果显示该水凝胶具有较高的载药量(5.15mg/g)和较高的包封率(96.6%),缓释性能的研究显示该水凝胶的缓释可长达4天,晶体衍射结果证实在水凝胶包裹PDRN的过程中,PDRN的结构无明显破坏。结论:封装PDRN的纳米纤维水凝胶具有较高的载药量、较高的包封率和较长的缓释性能,是一种理想的基质修复材料。目的:对PDRN、s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN促进细胞增生及血管再生的作用进行研究。方法:通过CCK8方法研究PDRN、s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN对细胞增生的影响,通过RT-PCR以及Western-blotting研究PDRN、s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN对细胞因子释放及血管再生的影响;通过三维机制侵入实验研究s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN对细胞迁移的影响;通过血浆、血小板蛋白粘附实验研究s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN对血液相容性的影响。结果:通过上述实验我们发现,PDRN、s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN均能促进细胞增殖、促进细胞因子的释放并且促进细胞迁,并且s NAG纳米纤维负载PDRN的血液相容性最佳。结论:PDRN、s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN均能促进细胞增生及血管再生。目的:通过动物实验,比较PDRN、s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN治疗糖尿病小鼠皮肤溃疡的效果。方法:建立糖尿病小鼠皮肤溃疡模型并分组,用RT-PCR以及Western-blotting分别检测经PDRN、s NAG纳米纤维以及s NAG纳米纤维负载PDRN处理后的小鼠相关细胞因子的表达。将创面组织进行切片染色,观察染色后的细胞增生、炎症浸润及血管新生情况。从造模当天开始,定期记录小鼠背部创面的开放伤口面积、伤口收缩度和表皮再生面积,从而比较各分组之间的伤口愈合度。通过恒定的速度牵拉伤口两端的皮肤,记录当伤口崩裂时的牵拉力量和距离,从而比较各分组之间愈合伤口的强度。结果:通过比较RT-PCR以及Western-blotting的结果我们发现,PDRN、s NAG及s NAG+PDRN均能使糖尿病小鼠相关细胞因子的表达升高,其中s NAG+PDRN组细胞因子的表达升高最明显。通过HE染色及免疫组化染色我们发现,PDRN、s NAG及s NAG+PDRN均能促进细胞增殖及血管新生,进而促进伤口愈合,其中s NAG+PDRN组的细胞增殖及血管新生较其他组明显。通过测量小鼠背部开放伤口的面积、伤口收缩度、表皮再生面积以及伤口愈合强度我们发现,PDRN、s NAG及s NAG+PDRN均能促进糖尿病小鼠溃疡的愈合,其中s NAG+PDRN组的溃疡面愈合时间最短,愈合强度最佳。结论:PDRN、s NAG及s NAG+PDRN被用于治疗糖尿病小鼠皮肤溃疡,均能促进溃疡面结痂、局部细胞增生、细胞因子释放以及促进新生血管形成,其中s NAG负载PDRN的治疗效果最佳,表明s NAG联合PDRN治疗溃疡时具有协同作用。本研究为今后的组织工程创面修复领域提供了新的研究方向。
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