论文部分内容阅读
研究表明,受到创伤后的皮肤在愈合过程中需要多种细胞、细胞因子及细胞外基质的参与。在经历炎症、组织形成、组织重塑三个阶段后,创面最终会形成瘢痕组织。临床上按照瘢痕有无异常增生状态将瘢痕分为非病理性瘢痕和病理性瘢痕两大类,其中病理性瘢痕对皮肤的美观性影响较大,但其形成的机制尚不清楚。硫氧还蛋白作用蛋白（TXNIP）是一种内源性的Trx抑制蛋白,与Trx活性半胱氨酸残基结合之后,通过抑制Trx抗氧化功能,发挥缩短细胞周期、诱导细胞凋亡与自噬、诱导氧化应激、调控线粒体功能、参与慢性炎症反应以及调节糖脂代谢等作用。目前,关于TXNIP的研究主要集中在糖代谢相关疾病、心肌损伤相关疾病、纤维化相关疾病、阿尔兹海默症以及各类癌症等疾病。既往研究发现,在病理性瘢痕的发生发展中,慢性炎症起到了促进作用,而在慢性炎症参与的多种疾病的发生机制的研究当中,TXNIP通过TXNIP-NLRP3-caspase-1-IL-1β/IL-18通路促进多种组织纤维化并起到了至关重要的作用。此外,TXNIP还可以通过介导血管内皮生长因子（VEGF）与血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）之间的通路参与新生血管的形成。本研究团队在前期研究中通过免疫组化方法也验证了在血管内皮细胞中TXNIP的确存在高表达。同时,也检测了病理性瘢痕、正常皮肤中TXNIP的表达情况,发现TXNIP在病理性瘢痕中表达量高于正常皮肤。而将样本按临床诊疗因素进行分类和分组再次分析时,发现女性、有伴随症状病理性瘢痕分组中TXNIP表达量较高,提示TXNIP在病理性瘢痕发生发展过程中可能具有正相关的作用。本研究在前期研究的基础上,从蛋白水平和分子水平进行检测和比较,以进一步验证前期研究结果,探讨TXNIP在病理性瘢痕发生发展中的作用。研究目的用qRT-PCR法检测TXNIP mRNA水平和Western blot法检测TXNIP蛋白表达水平,研究其在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、非病理性瘢痕以及正常皮肤中的表达情况,验证TXNIP在病理性瘢痕中存在高表达,进一步证实TXNIP与瘢痕发生发展可能存在正相关作用。同时通过不同研究变量将样本进行多角度分类和分组后检测TXNIP表达量,明确哪些临床因素是属于TXNIP在瘢痕发生发展过程中的最相关因素,为临床诊疗提供相应理论支持。材料与方法1.研究对象本研究纳入郑州大学第一附属医院2021年2月～2021年12月因体表瘢痕或急诊外伤就诊的59例患者为研究对象,签署知情同意书后给予体表瘢痕切除术或清创美容缝合术。收集术后送病理检查后剩余的瘢痕组织或修剪创缘时残余的皮肤组织,其中包括瘢痕疙瘩20例,增生性瘢痕14例,非病理性瘢痕14例,正常皮肤11例。按照标本的组织类型不同,将所有标本分为四组,分别为瘢痕疙瘩组、增生性瘢痕组、非病理性瘢痕组以及正常皮肤组。2.研究方法1.qRT-PCR法检测各组标本中TXNIP的mRNA水平。2.Western blot法检测各组标本中TXNIP的蛋白表达水平。3.对病理性瘢痕组织使用温哥华瘢痕量表（VSS）进行评分,研究病理性瘢痕中TXNIP的蛋白表达水平与VSS评分高低的相关性。4.收集病理性瘢痕患者的相关临床因素（包括:性别、年龄、部位、伴随症状、治疗史、家族史）,了解TXNIP的蛋白表达与这些临床因素的相关性。采用SPSS26.0软件,以x±s表示计量资料,采用t检验,以α=0.05为检验水准,P＜0.05有统计学意义。结果1.qRT-PCR法检测各分组中TXNIPmRNA水平qRT-PCR法检测结果显示,TXNIP的mRNA平均水平在瘢痕疙瘩组中为1.01±0.01、增生性瘢痕组中为0.95±0.05、非病理性瘢痕组中为0.51±0.02、正常皮肤组中为0.45±0.05。瘢痕疙瘩组和增生性瘢痕组中TXNIP的mRNA水平明显高于非病理性瘢痕组和正常皮肤组,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.Western blot法检测各分组中TXNIP蛋白表达水平Western blot法检测结果显示,瘢痕疙瘩组中TXNIP蛋白相对表达量为2.14±0.65,增生性瘢痕组中TXNIP蛋白相对表达量为1.90±0.65,非病理性瘢痕组中TXNIP蛋白相对表达量为1.04±0.12,正常皮肤组中TXNIP蛋白相对表达量为0.98±0.11。瘢痕疙瘩组和增生性瘢痕组中TXNIP的蛋白表达水平明显高于非病理性瘢痕组和正常皮肤组,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.TXNIP的蛋白表达水平与病理性瘢痕VSS评分的高低的相关性研究病理性瘢痕高评分组中TXNIP蛋白相对表达量为2.36±0.54,病理性瘢痕低评分组中TXNIP蛋白相对表达量为1.37±0.82,病理性瘢痕高评分组中TXNIP蛋白相对表达量高于低评分组,两组间差异有统计学意义（P＜0.05）。4.病理性瘢痕TXNIP蛋白表达量与不同临床因素的相关性研究病理性瘢痕女性组中TXNIP蛋白的相对表达量为2.43±0.52,男性组为1.41±0.13;在年龄＜40岁组中,TXNIP蛋白相对表达量为2.11±0.68,年龄＞40岁组中为1.72±0.36;在头面部组中,TXNIP蛋白相对表达量为2.33±0.65,躯干组中为2.07±0.66,四肢组中为1.74±0.55;有伴随症状组中,TXNIP蛋白相对表达量为2.27±0.64,无伴随症状组中为1.49±0.20;有治疗史组中,TXNIP蛋白相对表达量为2.21±0.65,无治疗史组中1.82±0.60;有家族史组中,TXNIP蛋白相对表达量为2.42±0.24,无家族史组中为2.00±0.67,病理性瘢痕中TXNIP的蛋白表达高低在性别、伴随症状的不同分组间差异有统计学意义（P＜0.05）,在年龄、部位、治疗史、家族史的不同分组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论1.TXNIP在各组中的表达水平由高到低依次为瘢痕疙瘩组、增生性瘢痕组、非病理性瘢痕组、正常皮肤组,提示瘢痕的严重程度与TXNIP的表达水平可能存在正相关作用。2.在所有研究变量中,女性和有伴随症状可能是影响在病理性瘢痕发生发展时TXNIP水平的最相关的临床因素。