【摘 要】
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目的:1.探讨C57小鼠构建SOP模型的方法,明确龟板水提液治疗SOP的作用,并基于巨噬细胞极化通路探讨其机制。2.基于经典C57BL/6小鼠骨缺损模型,探讨不同巨噬细胞极化亚型对骨愈合的调控作用。3.检测SOP患者血清TNF-α表达水平,初步探讨SOP的骨免疫机制。方法:1.基于巨噬细胞极化通路探讨龟板水提液治疗SOP的作用 选取30只8周龄的雄性C57小鼠,,分别随机分为对照组、SOP组、SO
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目的:1.探讨C57小鼠构建SOP模型的方法,明确龟板水提液治疗SOP的作用,并基于巨噬细胞极化通路探讨其机制。2.基于经典C57BL/6小鼠骨缺损模型,探讨不同巨噬细胞极化亚型对骨愈合的调控作用。3.检测SOP患者血清TNF-α表达水平,初步探讨SOP的骨免疫机制。方法:1.基于巨噬细胞极化通路探讨龟板水提液治疗SOP的作用 选取30只8周龄的雄性C57小鼠,,分别随机分为对照组、SOP组、SOP+龟板干预组,每组各10只。造模方法同前。10周后将各组小鼠进行取材,应用micro-CT检测L4骨微细结构,HE观察大脑中海马组织的形态,HE、TRAP染色观察L4中骨组织微细形态与破骨细胞数量,Western Blot检测腰椎INOS和ARG1的蛋白质表达水平。2.体外诱导巨噬细胞极化后,局部注射不同巨噬细胞极化亚型观察其对骨愈合的作用选取48只15周龄的雄性C57小鼠,分别随机分为PBS组、M1组、M2组,每组各8只,总共6组。各组均进行胫骨骨缺损造模,并在造模后即刻、每隔3天在骨缺损处,分别局部注射PBS、M1巨噬细胞与M2巨噬细胞。在术后第2周、第4周对上述小鼠进行取材。取材后应用micro-CT检测胫骨骨缺损处结构,HE染色观察其骨组织微细形态,TRAP染色观察胫骨骨缺损处破骨细胞数量与破骨细胞周长百分率,集分光密度法对胫骨骨缺损处INOS和ARG1的蛋白质表达水平。3.临床研究分别收集老年组和非老年组患者血清标本各80例,检测两组患者的TNF-α含量。结果:1.基于巨噬细胞极化通路探讨龟板水提液治疗SOP的作用（1）腰椎骨微细结构参数的比较:雄性小鼠中,与对照组相比,SOP组BV/TV、Tb.N减少、Tb.Sp增加,而这些都在龟板干预后得到了逆转。上述改变均具有统计学意义。（2）HE,尼氏染色观察大脑中海马组织的形态:与对照组相比,SOP组的海马神经细胞出现异常变化,细胞体积缩小,核不规则,细胞排列散乱。与SOP组相比,SOP+PTE组的海马神经细胞得到恢复。（3）腰椎骨组织HE染色:与对照组相比,SOP组的骨小梁数量减少、骨小梁纤细且断裂、髓腔增大。与SOP组相比,SOP+PTE组的骨小梁数量增加,骨小梁增粗且连续性明显好转,髓腔相对变小。（4）腰椎骨组织TRAP染色:与对照组相比,SOP组中破骨细胞数量（Oc.N/BS）（/mm）、破骨细胞周长百分率（Oc.S/BS）（%）并无差异。应用龟板水提液干预后,SOP+PTE组的上述二者较SOP组均显著减少（p<0.05）。（5）腰椎蛋白表达情况的比较:雄性小鼠中,对比SOP组,SOP+PTE组的i NOS蛋白表达下降;ARG1蛋白表达上升。3.局部注射不同巨噬细胞极化亚型观察其对骨愈合的作用（1）胫骨骨缺损的骨微细结构参数的比较:无论是愈合早期（2周）还是愈合后期（4周）,与PBS组、M1组相比,M2组的胫骨骨缺损骨皮质愈合更好,愈合率更高,BV/TV更高（p<0.05）。（2）胫骨骨缺损处HE,Trap染色:在造模2周后,与PBS、M1组相比,M2组的骨缺损处愈合率更高（p<0.05）;而在造模4周后,与PBS,M2组的骨缺损处愈合率更高（p<0.05）。但无论2周还是4周后,3组之间的破骨细胞数量并无差异。（3）INOS和ARG1的蛋白质表达水平:造模2周的时候,与PBS、M1组相比,M2组的i NOS蛋白表达更低（p<0.05）,但ARG1表达没有统计学差异。但造模4周的时候,与PBS、M1组相比,M2组的ARG1蛋白表达最低（p<0.05）。3.临床研究与年轻男性组相比,老年男性组的血清TNF-α表达水平显著升高（P<0.05）。女性组之间则没有统计学意义。结论:1.采用去睾丸手术+半乳糖干预得到的SOP小鼠模型符合雄性老年性骨质疏松的变化。且龟板水提液可通过抑制M1巨噬细胞的极化,促进M2巨噬细胞的极化,从而改善SOP导致的骨量丢失。2.通过局部注射M2巨噬细胞,直接改变巨噬细胞极化M1/M2平衡,可以促进骨缺损后的骨皮质愈合。3.临床研究:验证男性内环境巨噬细胞极化平衡往促M1端点倾斜,可能是介导SOP发病的重要因子。
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