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目的:通过检测人类免疫缺陷病毒-1(Human Immunodeficiency Virus-1,HIV-1)感染者外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs)、CD3+T细胞、CD8+T细胞中程序性死亡因子1(Programmed Death-1,PD-1)、蛋白质酪氨酸激酶Src和蛋白质酪氨酸磷酸酶2(SHP2)的表达,来探求HIV-1感染过程中PBMCs、CD3+T细胞、CD8+T细胞上PD-1的表达与Src和SHP2磷酸化水平的相关性,探求病毒感染过程中PD-1的表达对Src、SHP2的影响规律。方法:1.依据中华人民共和国《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》(WS 293-2008),在广西壮族自治区疾病预防控制中心募集HIV-1感染者62例。根据CD4+T细胞计数值将感染者分为慢性HIV-1感染者(Chronic HIV-1 infected persons,CPs)33例和典型艾滋病进展者(Typical AIDS progressors,TPs)29例(上述患者的纳入标准:CPs指CD4+T细胞计数≥350/μl、未接受抗病毒治疗者;TPs指感染至纳入研究时间不超过10年、CD4+T细胞计数<350/μl、未接受抗病毒治疗者);另收集18名健康捐赠者(Healthy donors,HDs)的血液作为健康对照组。以上被研究者均排除乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)合并感染的可能。2.于早晨安静并空腹的状态下抽取HIV-1感染者和健康捐赠者的静脉外周血置于真空采血管中,加入与外周血等体积的RPMI-1640培养液混匀,用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞并用RPMI-1640洗两次,将PBMCs计数后浓度调整为1×10~7个/ml;3.加入适量的荧光素标记的抗人单克隆抗体Pacific Blue Mouse anti-human CD3、BV510 Mouse anti-human CD8、APC anti-human PD-1孵育,再加入Purified anti-human CD3和Purified anti-human CD28刺激剂,在37℃培养箱中刺激15分钟后用Fixation Buffer和Perm BufferⅢ分别固定破膜后加入适量的荧光素标记的抗人单克隆抗体PE Mouse anti-Human SHP2与PE Mouse anti-Human Src孵育;4.用多聚甲醛固定并过滤至流式管上流式细胞仪检测,以FSC-SSC确定淋巴细胞群,分别检测PBMCs、CD3+T细胞、CD8+T细胞上Src、SHP2和PD-1分子的表达水平;5.采用Prism6.0统计软件进行分析与处理。计量资料以(?)表示。用非配对t检验比较CPs组、TPs组与HDs组样本中PD-1、Src和SHP2表达水平的差别,以P<0.05为差异具有统计学意义;采用Pearson相关性分析法分析同一样本参数之间Src、SHP2和PD-1表达水平的相关性,以P<0.05表示两参数间具有相关关系,以r值表示相关系数。结果:1.HIV-1感染者PBMCs上PD-1、Src、SHP2的表达水平:TPs组PBMCs上PD-1的表达频率高于CPs组与HDs组(P=0.0415,P<0.0001),CPs组PBMCs上PD-1的表达频率高于HDs组(P<0.0001);TPs组与CPs组PBMCs上Src的表达频率均低于HDs组(P=0.0048,P=0.0107);TPs组与CPs组PBMCs上SHP2的表达频率均高于HDs组(P=0.0015,P=0.0012);HIV-1感染者CD4计数与PD-1呈负相关(P=0.0006),与Src呈正相关(P=0.0038),与SHP2呈负相关(P=0.0487);HIV-1感染者PD-1与Src之间的表达呈负相关(P=0.0422),与SHP2的表达呈正相关(P=0.0354)。2.HIV-1感染者CD3+T细胞上PD-1、Src、SHP2的表达水平:TPs组CD3+T细胞上PD-1的表达频率高于CPs组与HDs组(P=0.0171,P<0.0001),CPs组CD3+T细胞上PD-1的表达频率高于HDs组(P<0.0001);TPs组与CPs组CD3+T细胞上Src的表达频率均低于HDs组(P=0.0035,P=0.0012);TPs组与CPs组CD3+T细胞上SHP2的表达频率均高于HDs组(P=0.0017,P=0.0022);HIV-1感染者CD4计数与PD-1呈负相关(P=0.0028),与Src呈正相关(P=0.0020),与SHP2呈负相关(P=0.0218);HIV-1感染者PD-1与Src之间的表达呈负相关(P=0.0499),与SHP2的表达呈正相关(P=0.0155)。3.HIV-1感染者CD8+T细胞上PD-1、Src、SHP2的表达水平:TPs组CD8+T细胞上PD-1的表达频率高于CPs组与HDs组(P=0.0451,P<0.0001),CPs组CD8+T细胞上PD-1的表达频率高于HDs组(P<0.0001);TPs组与CPs组CD8+T细胞上Src的表达频率均低于HDs组(P=0.0271,P=0.0499);TPs组与CPs组CD8+T细胞上SHP2的表达频率均高于HDs组(P=0.0023,P=0.0025);HIV-1感染者CD4计数与PD-1呈负相关(P=0.0285),与Src呈正相关(P=0.0299),与SHP2呈负相关(P=0.0425);HIV-1感染者PD-1与Src之间的表达呈负相关(P=0.0036),与SHP2的表达呈正相关(P=0.0212)。结论:HIV-1感染者PD-1的表达频率比健康对照组显著升高且随病程的加剧而升高;HIV-1感染过程中PD-1可能通过负向调控Src的磷酸化水平影响免疫细胞的活化过程而通过正向调控SHP2的磷酸化水平影响免疫细胞的抑制机制。