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在鱼类养殖的过程中,高脂饲料会影响鱼类肝脏脂肪代谢功能,从而诱导草鱼肝脏脂肪积累,产生“营养性脂肪肝”现象。医学研究认为,肠道屏障功能与非酒精性脂肪肝的发生密切相关,相关学者提出“肠-肝轴”的概念。目前,基于“肠-肝轴”研究高脂饲料诱导鱼类肝脏脂肪积累的报道尚不多见。同时,本课题组前期研究表明,在基础饲料中添加2.5%的共扼亚油酸(CLA)能降低草鱼肝脏脂肪积累。为探究“肠-肝轴”的概念是否同样在鱼类上适用,并在此基础上验证CLA是否通过“肠-肝轴”发挥降脂功效及其机制。我们以草鱼为研究对象,设计了 2个生长试验,试验周期为12周:1)配制基础组(添加大豆油2.8%+鱼油1.8%)和高脂组(大豆油6.3%+鱼油1.8%)两种试验饲料,研究高脂饲料对草鱼生长性能、肠道及肝脏相关指标的影响。2)配制高脂组(配方同上)和CLA组(大豆油3.8%+鱼油1.8%+CLA 2.5%)两种饲料,研究CLA对草鱼生长性能、肠道及肝脏相关指标的影响。试验结果如下:(1)生长性能和形态学指标显示,通过12周的养殖,高脂组的草鱼相对增重率(WGR)、特定生长率(SGR)显著低于基础组(P<0.05),而肝脏脂肪含量、肝指数(HSI)和内脏指数(VSI)显著高于基础组(P<0.05)。生理生化指标结果显示,与低脂组相比,高脂组草鱼血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、血浆中内毒素(LPS)以及肝脏丙二醛(MDA)的水平显著升高(P<0.05);肝脏中过氧化氢酶(CAT)的活性显著降低(P<0.05)。组织病理学观察显示,高脂饲料导致草鱼肝脏中脂滴的数量和大小增加,肝脏细胞出现病灶、排列紊乱,细胞核偏移和细胞纤维化等现象。脂类代谢相关基因表达显示,高脂组草鱼肝脏中胆固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的mRNA表达量显著高于基础组(P<0.05),高脂组草鱼肝脏中脂肪酸合成酶(FAS)的mRNA表达量显著低于基础组(P<0.05)。肝脏免疫相关基因表达显示,高脂组草鱼肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素8(IL-8)、白介素1β(IL-1β)、核转录因子(NF-κBP65)、激酶复合物α(IKKα)和激酶复合物β(IKKβ)的mRNA表达量显著低于基础组(P<0.05)。(2)肠道紧密连接蛋白相关基因分析显示,高脂组草鱼前肠紧密连接蛋白Occludin、Claudin c 和 Claudin 15a 的 mRNA 表达量显著低于基础组(P<0.05);中肠紧密连接蛋白 Occludin、Claudin b、Claudin 3 和 Claudin 15a 的 mRNA 表达量显著低于基础组(P<0.05);后肠紧密连接蛋白Occludin和Claudin 3的mRNA表达量显著低于基础组(P<0.05),Claudin 15a的mRNA表达量显著高于基础组(P<0.05);前、中、后肠中ZO-1的表达量显著高于基础组(P<0.05)。肠道免疫相关基因分析显示,高脂组草鱼前肠IL-1β的mRNA表达量显著高于基础组(P<0.05),TNF-α和IFN-γ2的mRNA表达量在高脂组有上升的趋势(P>0.05);中肠TNF-α和IL-8的mRNA表达量显著低于基础组(P<0.05);后肠TNF-α、IL-8和IFN-γ2的mRNA表达量显著低于基础组(P<0.05)。前、中肠NF-KBP65的mRNA表达量显著低于基础组(P<0.05);中、后肠IKKα的表达量显著低于基础组(P<0.05),IKKβ和IKKγ在高脂组中有下降的趋势(P>0.05)。(3)生长性能和形态学指标显示,CLA对草鱼的生长率无显著影响(P>0.05),CLA组草鱼肝脏中脂肪含量和肝指数(HSI)显著低于高脂组(P<0.05)。生化指标结果显示:CLA组草鱼血清中AST、碱性磷酸酶(ALP)、TG和总胆固醇(TC)的含量显著低于高脂组(P<0.05),总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)以及肝脏MDA和CAT的水平显著高于高脂组(P<0.05)。组织病理学观察显示,CLA改善了草鱼肝脏细胞出现病灶、排列紊乱、纤维化和肝脏细胞核偏移的情况,同时CLA导致肝脏细胞中脂滴的大小和数量减少。脂类代谢相关基因分析显示,CLA组草鱼肝脏中FAS、ACC、LPL、HSL和PPAR-α的mRNA表达量显著高于高脂组(P<0.05),SREBP-1c的mRNA表达量显著低于基础组(P<0.05)。肝脏免疫相关基因表达显示,CLA组草鱼肝脏中TNF-α、IL-8、IL-10、IL-1β、PPAR-γ和IκBα的mRNA表达量显著高于高脂组(P<0.05),CLA组草鱼肝脏中NF-κBP65、IKKα、IKKβ和IKKγ的mRNA表达量显著高于高脂组(P<0.05)。(4)肠道紧密连接蛋白相关基因分析显示,CLA组草鱼前肠紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的mRNA表达量显著低于高脂组(P<0.05),Claudin c的mRNA表达量显著高于高脂组(P<0.05);中肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin 3和Claudin 12的mRNA表达量显著低于高脂组(P<0.05);CLA组草鱼后肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin 3的mRNA表达量显著低于高脂组(P<0.05),Claudin c的mRNA表达量显著高于高脂组(P<0.05)。肠道免疫相关基因分析显示,CLA组草鱼前、中、后肠TNF-α的mRNA表达量显著低于高脂组(P<0.05),前、中肠PPAR-γ的mRNA表达量显著高于高脂组(P<0.05),前肠IL-8的mRNA表达量显著低于高脂组(P<0.05);前、中、后肠NF-κB P65和IKKα的mRNA表达量显著低于高脂组(P<0.05),CLA组草鱼中肠IκBα和IKKβ的mRNA表达量显著低于高脂组(P<0.05)。对以上试验结果讨论分析,我们发现高脂饲料诱导的草鱼肝脏脂肪积累与肠道功能密切相关,即“肠-肝轴”理论同样适用于草鱼;CLA能在草鱼肝脏组织中发挥降脂功效。然而,CLA对草鱼肠道紧密连接蛋白的mRNA表达无改善作用。