江南卷柏微生物型萜类合成酶的功能研究

来源 :陕西师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xjtuzhanglei
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
萜类化合物是一类结构多样的植物次生代谢产物,它们不仅对植物的生长和发育至关重要,而且在植物与环境之间的相互作用中发挥着重要功能。萜类合成酶(Terpene synthases,TPS)是催化萜类化合物合成的关键酶。微生物型萜类合成酶(Microbial terpene synthase-like,MTPSL)是非种子植物中特有的萜类合成酶,在江南卷柏(Selaginella moellendorffii)中首次被鉴定。与典型植物TPS相比较,MTPSL与微生物TPS的进化关系更近,它们广泛存在于非种子植物中,在种子植物和绿藻中不存在。MTPSL仅包含一个α结构域,其富含天冬氨酸基序显示出两个变体:DDxxx和DDxxxD基序。目前,尚缺乏对SmMTPSL基因全面的鉴定和功能表征。本研究选择江南卷柏作为研究对象,系统性地从以下五个方面进行了深入研究,包括不同激素处理对江南卷柏萜类物质释放的影响、SmMTPSL的识别、分析与功能预测、酶的活性检测、基因表达模式分析以及体外抑菌功能研究。主要研究结果如下:(1)用不同激素处理江南卷柏,并测定其释放的挥发性萜类化合物,GC-MS检测结果显示,使用茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)、丙甲菌素(Alamethicin,ALA)、6-BA(6-Benzylaminopurine)、脱落酸(Abscisic acid,ABA)和独脚金内酯(Strigolactone,SL)激素处理植株后,从挥发物中分别检测到3、4、1、3和2种挥发性萜类化合物,其中ALA处理对江南卷柏的作用最显著。由此说明,江南卷柏能释放出不同的挥发性萜类化合物对不同胁迫做出响应。(2)应用三代高通量测序技术对江南卷柏进行转录组测序,利用生物信息学方法识别出8个SmMTPSL基因,并对它们进行分析与功能预测。利用TargetP 2预测SmMTPSL的定位,结果显示SmMTPSL46包含靶向肽,定位于线粒体;SmMTPSL5、SmMTPSL15、SmMTPSL47、SmMTPSL33 和 SmMTPSL37 包含信号肽,定位于分泌途径;SmMTPSL19和SmMTPSL23定位于细胞质中。多序列比对结果说明,8个SmMTPSL的C端均包含两个高度保守的富含天冬氨酸基序:DDxx[D/E]和NSE/DTE基序。系统发育分析发现,SmMTPSL与4个蕨类MTPSL(AcMTPSL1、CpMTPSL1、Mp1MTPSL 和 DbMTPSL)的进化关系更密切。蛋白三维结构建模和分子对接的结果表明,8个SmMTPSL均能通过氢键、π-烷基、π-阴离子和范德华力与配体FPP和GPP相互作用,形成稳定的复合物。(3)将8个SmMTPSL进行原核表达,分别以GPP和FPP作为底物鉴定它们的催化活性。GC-MS检测结果显示,当以GPP为底物时,8个SmMTPSL与底物GPP反应后均产生以香叶醇为主的萜类化合物;当以FPP为底物时,多个SmMTPSL均能产生金合欢烯、大牛儿烯、法呢醇和香橙烯。这些结果表明,它们是具有单萜和倍半萜合成酶活性的多功能酶。(4)使用实时荧光定量PCR检测SmMTPSL23、SmMTPSL33和SmMTPSL37基因在ALA和MeJA处理后的表达模式。结果显示,SmMTPSL23、SmMTPSL33和SmMTPSL37均能响应ALA和MeJA的胁迫,在处理后它们的表达水平均有不同程度的变化,且存在着时间差异性。(5)结合抑菌实验,检测SmMTPSL23、SmMTPSL33和SmMTPSL37的体外抑菌活性。结果表明,SmMTPSL23、SmMTPSL33和SmMTPSL37的酶促产物对丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均表现出不同水平的抑菌活性,其中,SmMTPSL23的抑菌活性最强,SmMTPSL37次之,SmMTPSL33的抑菌活性最弱。同时发现,与Pst DC3000相比,它们对金黄色葡萄球菌的生长表现出更强的抑制作用。
其他文献
肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一种常见的肠道临床疾病,其症状包括腹痛、腹泻等,没有实质性病理(形态学、生物化学指标等异常)损伤的一组肠道临床障碍性综合征。随着生活方式和饮食习惯的变化,包括精神压力的增加,其发病率逐年增加。IBS在临床中易出现反复,降低患者生活质量,增加经济负担,有效的治疗具有重要的意义。当前大多数研究发现,IBS患者的血清或血浆、结肠组
学位
黄土高原生态环境脆弱、土壤侵蚀严重,是我国乃至全球水土流失和生态环境退化最为严重的地区之一。降雨入渗作为生态水文过程的重要组成部分,决定着土壤的蓄水和径流,在水循环和潜在的水土流失、土壤侵蚀等水文响应中起着重要作用。研究黄土高原生态水文过程将有助于改善其区域生态环境,维护该区域土壤系统功能。黄土高原植被恢复过程中,植物根系活动是改善土壤性质,提高土壤入渗和蓄水能力的重要驱动因素,而土壤质地也将影响
学位
人类活动与气候变化对全球生态系统氮循环特征演变有深远影响。近年来,越来越多的研究关注不同类型的生态系统氮循环特征。森林生态系统各组分的稳定氮同位素比率(δ15N)的测定可以为植物内外氮循环发生机制提供解释,从而加深我们对于生态系统尺度上氮循环的认识。树轮δ15N指示的氮循环变化与气候和环境条件密切相关,其特征反映了长时间尺度森林生态系统氮循环的动态变化,弥补了站点监测资料的不足缺陷。测定森林生态系
学位
近些年来,强激光场中各种体系的高次谐波辐射(HHG)研究成为强场物理领域中的一个热点关注,其在强场物理研究中具有重要的意义。得益于计算机性能的飞速提升,多维度体系的计算效率大大提高,极大地缩短了理论研究的周期;同时随着强场实验技术的不断发展,对复杂精细分子的操控以及特定光源的获取也成为了可能,如对称分子的准直和椭圆偏振激光的产生等。研究表明,原子、分子体系在椭圆偏振激光场驱动下的高次谐波,出现了不
学位
以白光发光二极管(WLED)为代表的第四代固态照明光源,具有发光效率高、节能和绿色环保等优点,在显示和照明等领域有着非常广阔的应用前景。稀土离子具有4f内层电子结构,当其掺杂到稳定的硼酸盐晶格中会产生独特的发光特性,因此,进行稀土掺杂的硼酸盐发光材料研究具有重要理论和实际意义。Ca2GeB207热稳定性好,合成方法简单,且Ca2+的半径与三价稀土离子半径类似,可以选择作为一种理想的硼酸盐发光基质材
学位
图像分割技术是按照图像内部特征,例如边缘、纹理、颜色,将图像划分为不同类型的区域,每个区域属于同一类且具有一致性或相似性。遥感图像目标分割则是将图像分割为具有实际语义信息的区域,是图像处理中的重要应用之一。通过对遥感图像处理,可提取建筑物、道路、海岸线、植被等不同地物目标,为城市建设、农业发展、灾害监测等应用提供指导,具有很高的应用价值。遥感数据具有规模较大、目标可能密集且尺度不一、光照、环境复杂
学位
诺丽果为巴戟属植物,其主要化学成分包括黄酮类、蒽醌类以及多糖等,诺丽果多糖是其主要活性成分,具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等广泛的生物活性。目前诺丽果多糖主要采用热水浸提法和超声波辅助水提法,提取率仅为6%~8%。闪式提取技术依靠高速剪切力和超动分子渗滤技术能够最大限度保留植物有效成分。因此,本课题采用正交设计优化闪式提取诺丽果多糖工艺,用以提高多糖的提取率,进而分离纯化诺丽果多糖并对其结构进行表征
学位
毛乌素沙地位于鄂尔多斯高原向黄土高原过渡区,是中国重要生态屏障,生态环境脆弱,强烈的风沙活动给当地生态环境和农牧业生产造成严重危害。近年来,毛乌素沙地的沙漠化程度发生明显转变,植被重建工作取得重大成果,在一定程度上抑制了沙丘的活化。但根据前人研究成果以及遥感影像分析发现,毛乌素沙地西北部仍存在沙丘活化现象,流动沙丘和半固定沙丘相间分布,植被覆盖差异较大。为探明西北部沙丘活化程度以及植被覆盖对沙丘活
学位
随着科技的发展,人脸识别及其相关技术已经得到人们越来越多的重视。虽然人脸识别技术日渐成熟,但是依旧存在着很多问题,比如光照条件,样本数量,样本姿态等因素都会影响到人脸识别算法的性能。研究者们设计了多种算法来解决各种问题,其中基于稀疏表示和低秩表示的算法尤其受到广大研究者的关注。本文针对小样本及样本边距等问题分别基于低秩表示和稀疏表示设计了两种改进的算法模型。(1)现有大多数线性回归方法使用传统的零
学位
目的:本研究从妊娠期高血压疾病患者角度出发,针对妊娠期高血压疾病单胎初产妇,了解孕前体重指数过高(超重/肥胖),其对血压升高后的心理、生理、医患互动及需求等方面的自身感受,结合早期预防机制,探讨早期预防中非药物治疗对患者产生的影响,以期得出有意义的结论,能够给早期预防非药物治疗工作开展提供相应指导。方法:本研究采用质性研究方法中的现象学研究法,运用目的抽样法选取某三甲医院产科门诊及住院部孕前体重指
学位