番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是布尼亚病毒科(Bunyaviridae)番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的重要病毒。番茄斑萎病毒属于负义链RNA病毒,基因组为三条不同长度的单链RNA。番茄斑萎病毒的主要昆虫传播介体为西花蓟马。西花蓟马食性杂,目前已知寄主植物多达500余种,包括辣椒、茄子、番茄等重要经济作物。随着西花蓟马的不断扩散蔓延,其寄主种类一直在持续增加。该病毒寄主范围极广,可侵染多达84科1000多种单子叶和双子叶植物,包括番茄、辣椒、烟草、花卉等重要的经济作物,造成世界范围内严重的经济损失。由于番茄斑萎病毒巨大的危害性,因此被列为世界十大最严重危害性植物病毒之一。因此对于番茄斑萎病毒的研究是有非常重要的意义的。通过在模式植物本氏烟上扩繁TSWV,采集发病的系统叶。液氮研磨后,通过蔗糖密度梯度离心法提纯病毒颗粒,聚丙烯酰胺凝胶电泳,割胶后质谱分析确定得到纯度较高的病毒颗粒。质谱的结果显示,提取的病毒颗粒中含有病毒的复制蛋白RdRP、糖蛋白Gn/Gc、非结构蛋白NSs、核衣壳蛋白N。此外还含有大量的植物蛋白,如微管蛋白、热激蛋白(HSP70/80)、钙连蛋白、网格蛋白、液泡膜质子泵等。其中,液泡膜质子泵蛋白(Vacuolar-ATPase)在病毒颗粒提取物中的含量尤其显著。该蛋白是一种多亚基的膜蛋白复合体,存在于细胞膜和细胞器膜上。最新的研究结果显示,液泡膜质子泵可能通过维持核内体的酸性环境,参与病毒在寄主细胞内扩散。在病毒颗粒提取物的质谱分析结果中,V-ATPase的A亚基的含量最高。由于V-ATPase蛋白对于研究番茄斑萎病毒在植物内的复制移动方式重要性,为此制备了V-ATPase-A的多克隆抗体以备进一步的研究。通过四次对新西兰白兔的免疫反应,制备得到效价为1:10000的V-ATPase-A的多克隆兔抗。通过蛋白免疫印迹实验(western blot),证明了该多克隆抗体可以特异性识别V-ATPase-A蛋白,且效果良好。