论文部分内容阅读
研究背景和目的
退行性椎间盘疾病是脊柱外科最常见的病变之一,其退变过程缓慢进展。根本病因尚未明确,目前所知椎间盘退变是在多种机制及细胞因子的共同作用下,椎间盘内的生化结构发生了改变,包括:椎间盘细胞的活性降低,髓核内水分丢失,组织成份发生改变,退变时椎间盘中蛋白多糖、糖胺聚糖下降,含水量减少。因椎间盘形态和生化结构发生变化,其缓冲、分散压力传导的能力下降,机械性能发生改变。有动物实验研究证明,髓核细胞活性的降低是椎间盘退变的重要特点。随着年龄的增长,椎间盘内的脊索细胞消失,类软骨细胞活性降低,同时伴有细胞外基质分泌减少,胶原成分改变,这些改变使得髓核细胞分泌外基质的能力降低,无法维持正常的椎间盘内部环境的平衡,正常的椎间盘结构发生破坏,最终导致其机械结构的失稳。
在临床工作中,很难对微观的生物学进行直接评估。随着影像学技术的发展,MRI已经成为各级别医院常规的检查手段之一,其已被公认为目前诊断椎间盘退变最合理精确的手段。近年来出现了很多基于MRI的椎间盘退变分型,其中最广泛被接受的MRI退变椎间盘分级为Pearce制定的五分级法,是目前能较好反应椎间盘退变的分类方法。
本研究通过实验,对不同退变程度腰椎间盘的髓核细胞进行培养及活性测定,明确髓核细胞活性与MRI退变分型的相关性。
方法
实验共取腰椎间盘髓核组织20例,均为我科收治单一手术节段患者,其中A组2例,为正常椎间盘髓核组织(PearceⅠ&Ⅱ型,脊柱外伤患者,年龄为22岁和24岁);B、C、D三组分别6例,分别为MRI分型轻、中、重度(PearceⅢ型,Ⅳ型,V型患者)退变椎间盘髓核组织(患者年龄在3545岁之间),均在同样条件下进行体外髓核细胞分离培养。
术中取得腰椎间盘髓核组织送入实验室,进行髓核细胞的分离与原代培养,实验过程采用传一代细胞,消化原代细胞计数后定量分置于培养板培养,于5d,10d,15d,20d,25d五个时间段消化用以细胞计数法和MTT比色法检测细胞活性。
结果
细胞计数结果:传一代髓核细胞计数在同时间点上A组明显高于B、C、D组,B组与C、D组之间存在统计学差异(P<0.05),C组和D组之间细胞计数无统计学差异,细胞计数的峰值出现在第20天。
MTT法测定结果:B、C、D组之间OD值(吸光值)在同时间点,各组之间均存在统计学差异(P<0.05),退变细胞OD值峰值出现在第20天,此后开始下降,提示细胞活性降低;正常髓核细胞OD值下降出现在25天之后。
结论
1.正常腰椎间盘组织髓核细胞活性明显高于退变椎间盘髓核细胞。
2.MRI分型轻、中、重度退变腰椎间盘髓核细胞活性与其分型基本相符。