【摘 要】
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目的:通过建立人舌鳞状细胞癌的顺铂耐药细胞模型,比较耐药细胞与亲本细胞间差异表达的miRNAs,寻找调节舌癌耐药的关键miRNAs。方法:1、采用顺铂浓度梯度递增法持续诱导建立顺铂耐药的人舌鳞癌细胞模型OSC-19/CDDP,并使用CCK-8法、Western blot检测鉴定细胞耐药性;2、通过基因芯片扫描比较OSC-19/CDDP与OSC-19间差异表达的miRNAs,并使用RT-qPCR验证
【基金项目】
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遵义医学院学术新苗培养及创新探索专项补助项目（编号:黔科合平台人才[2017]5733-008）； 遵义市科学技术局及遵义医学院附属口腔医院联合科技研发资金项目（编号:遵市科合社字[2018]241）； 遵义市科学技术局及遵义医学院附属口腔医院联合科技研发资金项目（编号:遵市科合社字[2018]248）；
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目的:通过建立人舌鳞状细胞癌的顺铂耐药细胞模型,比较耐药细胞与亲本细胞间差异表达的miRNAs,寻找调节舌癌耐药的关键miRNAs。方法:1、采用顺铂浓度梯度递增法持续诱导建立顺铂耐药的人舌鳞癌细胞模型OSC-19/CDDP,并使用CCK-8法、Western blot检测鉴定细胞耐药性;2、通过基因芯片扫描比较OSC-19/CDDP与OSC-19间差异表达的miRNAs,并使用RT-qPCR验证芯片结果;3、结合芯片结果以及RT-qPCR结果,通过化学转染上调OSC-19中miR-935及miR-514a-3p的表达,RT-qPCR验证转染效果,并使用CCK-8法检测OSC-19细胞的顺铂耐药性改变情况。结果:1、经过药物浓度梯度递增法持续诱导,获得了稳定的顺铂耐药细胞模型OSC-19/CDDP,顺铂药物浓度为0.8μg/ml。Western blot结果显示在OSC-19/CDDP细胞中耐药相关蛋白MDR1高表达,CCK-8法检测结果显示,耐药细胞OSC-19/CDDP的半数抑制浓度（IC50）从0.68μg/ml提高到6.50μg/ml,OSC-19/CDDP的顺铂耐药指数（RI）为9.56。2、基因芯片结果显示,OSC-19/CDDP较之于OSC-19有264个差异表达的miRNAs,其中有15个miRNAs差异超过20倍,包括6个下调的miRNAs,以及9个上调的的miRNAs;3、RT-qPCR结果显示,在OSC-19/CDDP中,miR-486-3p、miR-514a-3p以及miR-935的高表达,而miR-146b-5p低表达,与芯片检测结果一致;4、OSC-19细胞转染相应模拟物后,RT-qPCR结果显示,miR-935及miR-514a-3p的表达量升高;CCK-8检测结果显示,OSC-19细胞对顺铂的耐受性显著提升。结论:1、采用顺铂浓度梯度递增法可以诱导建立人舌癌顺铂耐药细胞模型OSC-19/CDDP。2、OSC-19/CDDP与OSC-19间存在大量差异表达的miRNAs,其中,miR-935及miR-514a-3p可能是调节顺铂耐药的关键基因。
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