【摘 要】
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研究目的:前列腺癌（Prostate Cancer,PCa）是男性泌尿生殖系统常见恶性肿瘤。我国PCa发病率呈逐年上升趋势。进展期PCa主要通过雄激素剥夺治疗（androgen deprivation therapy,ADT）,但大多数患者在ADT治疗2-3年后会进展为激素非依赖型前列腺癌（androgen independent prostate cancer,AIPC）。目前临床对 AIPC
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研究目的:前列腺癌（Prostate Cancer,PCa）是男性泌尿生殖系统常见恶性肿瘤。我国PCa发病率呈逐年上升趋势。进展期PCa主要通过雄激素剥夺治疗（androgen deprivation therapy,ADT）,但大多数患者在ADT治疗2-3年后会进展为激素非依赖型前列腺癌（androgen independent prostate cancer,AIPC）。目前临床对 AIPC 尚无有效治疗方法。因此,亟需寻找AIPC新的治疗靶点,为AIPC治疗提供新策略。研究发现促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（erythropoietin-producing hepatocellular receptor A2,EphA2）在AIPC细胞系中呈中高表达。本研究应用新型基因编辑技术CRISPR/Cas9系统敲除EphA2基因,探讨EphA2基因对AIPC细胞生物学性状的影响并初步探究其分子机制。研究方法:（1）负载CRISPR/Cas9系统的慢病毒转染AIPC细胞（PC3、DU145）后,通过DNA测序和Western blot技术检测基因编辑效率,优选靶向EphA2基因的向导RNA（guide RNA,gRNA）序列;（2）应用慢病毒转染细胞敲除EphA2基因,通过细胞增殖实验、细胞凋亡检测、细胞周期检测、细胞划痕实验及细胞迁移实验,研究敲除EphA2基因后AIPC细胞生物学性状的改变;（3）通过基因敲除及过表达,应用qPCR及Western blot分析初步探究EphA2基因影响AIPC细胞功能的分子机制。研究结果:（1）本研究优选出gRNA序列特异性高,能够高效剪切AIPC细胞（PC3、DU145）的EphA2基因,DNA测序显示基因剪切效率分别为72.9%（PC3细胞）和77.8%（DU145细胞）;Western blot检测显示EphA2蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;（2）应用负载CRISPR/Cas9系统的慢病毒转染AIPC细胞敲除EphA2基因,结果显示EphA2基因敲除后,显著抑制AIPC细胞迁移能力（P＜0.05）,但EphA2基因对AIPC细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡均未见显著影响（P＞0.05）;（3）通过基因敲除及过表达,应用qPCR及Western blot分析表明,CDH1（与肿瘤迁移相关）表达量的变化趋势与EphA2表达量变化呈负相关（P＜0.05）。结论:本研究应用CRISPR/Cas9系统高效敲除AIPC细胞系（PC3、DU145）的EphA2基因,有效抑制AIPC细胞的迁移能力;通过探究分子机制发现CDH1是EphA2的下游基因,EphA2可能通过CDH1发挥抑制AIPC细胞迁移能力,可作为AIPC靶向治疗的潜在靶点。
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