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肠出血性大肠杆菌O157:H7（Enterohemorrhagic Escherchia coli O157:H7, EHEC O157:H7）是一种重要食源性病原菌,可引起出血性肠炎（hemorrhagic colitis, HC）和溶血性尿毒综合征（hemolytic-uremic syndrome, HUS）。1982年在美国首次发现,我国1986年在江苏徐州市首次分离到O157：H7。1999在苏皖地区发生了暴发流行。EHECO157：H7的主要毒力基因包括噬菌体编码的志贺毒素、LEE （Locus of enterocyte effacement, LEE）毒力岛编码的紧密黏附素EAE （intimin）,质粒编码的溶血素等。我们实验室的研究发现1999年苏皖疫情菌株均携带1个新的38kb的质粒pO157Sal,1999年以后我国分离的菌株均没有这个质粒。功能不明。本研究应用一步缺失法在质粒pO157Sal的CDCO157p20036（第36个基因）和nikB基因之间插入了卡那霉素抗性标记基因,并通过接合试验证明了pO157Sal具有接合转移功能。使用SDS-变温方法成功消除了EHECO157:H7Xuzhou21菌株的质粒pO157Sa1,构建了质粒缺失株Xuzhou21m。将标记卡那霉素抗性的pO157Sal转化入Xuzhou21m,构建了质粒回补株Xuzhou21c,比较了三株菌在某些表型方面的差异,包括质粒拷贝数、酸抗性、stx2转录、细胞毒、刺激细胞产生血清细胞因子、鞭毛蛋白FliC的表达、动力以及碳源代谢谱等方面。我们提取两株菌的总RINA进行测序,基因的表达量用RPKM方法进行计算,发现pO157Sal上的52个基因都全部转录,一共发现168个差异表达基因,其中163个位于染色体和5个位于p0157质粒。与Xuzhou21m相比,Xuzhou21的上调基因有67个,下调基因有101个。GO注释和KEGG分类发现,这些差异表达基因与应激反应、适应不良环境以及毒力相关基因表达有关。7个差异表达基因与脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate, NaDC）抗性相关,包括多药输出系统亚单位基因（multidrug efflux system subunit gene, mdtA）、腺嘌呤特异的DNA甲基转移酶基因（adenine-specific DNA-methyltransferase gene,dam）、高渗透压诱导的周质蛋白基因（hyperosmotically inducible periplasmic protein gene, osm Y）和4个氧化还原相关基因（oxidation-reduction related genes）。osmY和跨内膜噬菌体休克蛋白基因（peripheral inner membrane phage-shock protein, pspD）与抵抗高渗透压有关。有些DEGs是毒力相关的,包括4个编码Ⅲ型分泌系统（Type Ⅲ secretion system, T3S S）效应蛋白的染色体基因和位于p0157上的肠溶血素D （enterohemolysin, ehxD）基因。DEGs结果表明质粒pO157Sal可影响染色体和p0157上的基因表达,质粒消除株Xuzhou21m在高渗透压或者含NaDC的M9培养基中比Xuzhou21生长速度慢；质粒回补株Xuzhou21c恢复了对高渗透压和胆盐的耐受。研究发现位于pO157Sal质粒上的stpA和hha可调控其他基因的表达。我们以质粒pBAD30为载体,构建了stpA和hha的回补株,发现hha有提高渗透压和胆盐耐受的作用,还抑制了某些毒力基因的表达,如T3SS效应蛋白espF和espH等。