猪链球菌(Streptococcus suis)是一种革兰氏阳性、兼性厌氧的球菌。可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症,同时可引起人中毒性休克综合征,感染后遗症包括失聪和关节炎,是一种重要的人畜共患病病原。根据其荚膜多糖抗原性的差异,分为35个血清型(1-34,1／2)及相当数量无法定型的菌株。菌株之间在毒力上存在着很大的差异,致病性强弱与其毒力岛的存在与否有很大关系。本研究以毒力最强、危害最严重、流行最广泛的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2, SS2)为研究对象,构建了感染相关因子trag基因的缺失株,通过动物模型评价了该突变株的毒力。同时,对于新发现的89K毒力岛,PCR检测了其在不同来源、不同血清型、不同地区的猪链球菌上的分布。1猪源毒力岛89K的检测根据新发现的89K毒力岛的序列设计引物,PCR检测此毒力岛在不同来源、不同血清型、不同地区的猪链球菌上的分布。结果表明,在40株不同来源、不同血清型的菌株中,只有12株含有89K毒力岛,且均为猪链球菌2型,其中两株为人源株,其他为猪源株。在猪链球菌9型和马兽疫亚种中均为阴性。2猪链球菌2型trag基因缺失株的构建根据猪链球菌2型人源98HAH33菌株全基因序列设计引物,构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为trag编码基因上、下游同源序列的基因敲除载体,通过同源重组构建trag基因缺失的突变株。PCR鉴定显示获得1株trag基因被敲除的突变株HA9801△trag。体外观察突变株HA9801△trag的基本生物学性状,发现其革兰氏染色及溶血性与野毒株相比没有明显变化,动物实验显示：野毒株对斑马鱼的LD50为3.8×104CFU／尾,trag块失株为4.9×105CFU／尾,毒力相比有所下降。为进一步探讨猪链球菌2型分子致病机理奠定了基础。3猪链球菌2型溶血素Ⅲ相关膜蛋白的表达溶血素Ⅲ相关膜蛋白位于89K毒力岛中。根据已发表的猪链球菌2型人源98HAH33株的溶血素Ⅲ相关膜蛋白的基因序列,分析选择免疫原性较高部分的基因序列设计和合成一对引物,扩增出这个蛋白部分基因并定向克隆到表达载体pET-32a(+)中,重组质粒通过PCR鉴定和测序后,转化入大肠杆菌BL21进行原核表达,SDS-PAGE显示表达产物约50kD, Western blot显示,其与猪源ZY05719株康复血清反应,抗原性良好。