论文部分内容阅读
目的:通过间接方法测定0～1岁婴儿粪便中残余乳糖含量,分析体外发酵模型对乳糖及其他多糖、水解酪蛋白和乳清蛋白的发酵代谢产物,探究婴儿乳糖在结肠中的发酵过程,进一步探讨乳糖不耐受症（Lactoseintolerance,LI）的发病机制,并为婴儿LI的诊断提供有价值的方法,以及为LI婴儿制定个性化及精准化的干预方案。资料与方法:观察组研究对象为2020年5月～2020年10月于苏州大学附属儿童医院消化科门诊及住院部就诊的30例1岁以内的存在腹泻、腹胀、肠绞痛症状的疑似LI婴儿,平均年龄为6.01±0.30个月,男女比例为18:12;同时选取至苏州市某社区卫生中心体检的1岁以内的32例健康婴儿作为对照组,平均年龄为6.03±0.27个月,男女比例为15:17。两组研究对象入组后根据月龄及喂养方式依次分为4个亚组:大于6月组、小于6月组、母乳喂养组、混合喂养组。收集研究对象的新鲜粪便标本于无菌、干燥、可密封的塑料容器中,于2小时内制成10%的粪便悬浊液,分成两份:第一份使用间接法测定粪便乳糖含量:向标本中分别加入纯净水（A管）、乳糖酶（B管）后置于37℃培养箱中孵育20分钟,使用生化分析仪分别检测A、B管的葡萄糖含量,计算出B管与A管之间的差值,所得数值即为加入乳糖酶水解后产生的净糖含量（C管）,可代表婴儿粪便中乳糖含量;第二份将粪便悬浊液依次接种于基础培养基（YCFA）、乳糖培养基（LAT）、乳果糖培养基（LAU）、低聚果糖培养基（FOS）、低聚半乳糖培养基（GOS）、菊粉培养基（INU）、可溶性淀粉培养基（STA）、水解酪蛋白培养基（YCP）、水解乳清蛋白培养基（YLP）中,在37℃培养箱中静置发酵24小时后,利用气体压力测量仪测定各培养基中产气量,并采用气相色谱法（Gas chromatography,GC）检测各培养基中的短链脂肪酸（Short chain fattyacid,SCFA）总酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸的含量;采用薄层层析法（Thin layer chromatography,TLC）测定乳糖培养基中乳糖降解率,根据杭州农科院王欣教授团队的研究结果,以50%、20%为界将所得的乳糖降解率分为高度、中度、轻度降解。最后将实验所得数据汇总至Microsoft Excel表中,应用SPSS 23.0对所得数据进行统计学分析。结果:1、对照组婴儿粪便残余乳糖含量稍低于观察组,但两组间比较,差别无统计学意义（P＞0.05）;月龄亚组中,大于6月的对照组婴儿粪便残余乳糖含量低于观察组（P＜0.05）;喂养方式亚组中,混合喂养的对照组婴儿粪便残余乳糖含量低于观察组（P＜0.05）;2、粪便悬浊液,除异丁酸外,对照组与观察组婴儿粪便中总酸、乙酸、丙酸、丁酸含量组间比较差别均无统计学意义（P＞0.05）;月龄亚组中,大于6月的对照组婴儿粪便中乙酸、异丁酸含量高于观察组P＜0.05);喂养方式亚组中,母乳喂养的对照组婴儿粪便中乙酸含量高于观察组（P＜0.05）;3、对照组粪便中乙酸:丙酸:丁酸占SCFA总酸的比值约为83.8:11.3:2.6;观察组粪便中三者占SCFA总酸的比值约为77.2:10.9:4.2;两组间比较,对照组乙酸百分比高于观察组（P＜0.05）;4、粪便发酵后,母乳喂养方式下,对照组婴儿乳糖高度、中度、轻度降解比例为25.00%:56.25%:18.75%;观察组婴儿乳糖高度、中度、轻度降解比例为:43.75%:31.25%:25.00%;混合喂养方式下,对照组婴儿乳糖高度、中度、轻度降解比例为:68.75%:25.00%:6.25%;观察组婴儿婴儿乳糖高度、中度、轻度降解比例为:57.15%:35.71%:7.14%;5、粪便发酵后,对照组婴儿粪便在LAT培养基中总酸含量高于观察组（P＜0.05）,与FOS培养基结果一致;月龄亚组中,对照组与观察组婴儿粪便在LAT培养基中总酸含量组间差别无统计学意义,大于6月的对照组在FOS、STA培养基中总酸含量高于观察组（P＜0.05）;喂养方式亚组中,母乳喂养的对照组在LAT培养基中总酸含量高于观察组（P＜0.05）,与FOS、INU培养基结果一致;6、粪便发酵后,对照组与观察组婴儿粪便在LAT培养基中乙酸含量组间差别无统计学意义,在FOS、GOS、INU、STA培养基中对照组乙酸含量高于观察组（P＜0.05）;月龄亚组中,对照组与观察组婴儿粪便在LAT培养基中乙酸含量组间差别无统计学意义,大于6月的对照组在FOS、STA培养基中乙酸含量高于观察组（P＜0.05）;喂养方式亚组中,对照组与观察组婴儿粪便在LAT培养基中乙酸含量组间差别无统计学意义,母乳喂养的对照组婴儿粪便在FOS、INU培养基中乙酸含量高于观察组（P＜0.05）;7、粪便发酵后,对照组与观察组婴儿粪便在LAT及各培养基中丙酸含量组间差别无统计学意义;月龄及喂养方式亚组中,在LAT及各培养基中丙酸含量两组之间比较,差别均无统计学意义;8、粪便发酵后,对照组婴儿粪便在LAT培养基中丁酸含量低于观察组（P＜0.05）,在LAU、GOS培养基中结果一致;月龄亚组中,大于6月的对照组在LAT培养基丁酸含量低于观察组（P＜0.05）,在LAU、GOS、STA、YCP、YLP培养基中结果一致;喂养方式亚组中,在LAT及各培养基中丁酸含量两组间比较,差别均无统计学意义;9、粪便发酵后,对照组与观察组婴儿粪便在LAT培养基中异丁酸含量组间差别无统计学意义;在STA、YCP培养基对照组异丁酸含量高于观察组（P＜0.05）;月龄及喂养方式亚组中,在LAT及各培养基中异丁酸含量组间比较差别均无统计学意义;10、粪便发酵后,对照组婴儿粪便在LAT培养基产气量低于观察组（P＜0.05）,与LAU、YCP、YLP培养基中产气结果一致;月龄亚组中,大于6月的对照组在LAT培养基产气低于观察组（P＜0.05）,在YCP、YLP培养基结果相同;喂养方式亚组中,混合喂养的对照组与观察组在LAT培养基产气量组间差别无统计学意义,在LAU、YCP、YLP培养基对照组产气量低于观察组（P＜0.05）。结论:1、婴儿饮食中,摄入的乳糖有一部分可以“逃逸”小肠乳糖酶的消化进入结肠;LI婴儿粪便乳糖含量增加,在混合喂养及添加辅食婴儿中表现明显,这可能与婴儿小肠粘膜受损,LPH分泌不足导致消化乳糖能力下降有关;2、乙酸是含量最高的SCFA;LI婴儿粪便乙酸含量降低,提示LI婴儿肠道菌群代谢乳糖能力降低;3、喂养方式对乳糖在结肠的降解率有明显影响,混合喂养儿的乳糖降解率高于母乳喂养儿,这可能与肠道菌群的成熟程度有关;4、LI婴儿粪便发酵后总酸含量降低、产气增加,进一步印证了 LI婴儿肠道菌群紊乱,发酵产气细菌增多,代谢乳糖的能力下降;5、本研究采用间接方法测定婴儿粪便中乳糖含量,利用体外发酵模型测得婴儿粪便在各培养基中降解率、产酸、产气量的变化情况,该方法学可靠,属国内首次研究,为分析和判断乳糖在结肠的代谢情况以及LI发病机制提供了一个新思路,为诊断和干预婴儿LI提供一个新方法。