简单节杆菌(Arthrobacter simplex)是工业上普遍使用的甾体C1,2位脱氢反应菌株。遗传背景的不清楚和分子生物学操作工具的缺乏,是该菌株分子改造受到限制的重要原因。本论文以简单节杆菌TCCC 11037为对象,建立适合该菌株的电转化条件,并通过选择不同来源的目的基因和不同的宿主菌株对该电转化条件的应用效果进行评价。同时,对表达载体的构建进行了初步探索。首先,以节杆菌组成型质粒pART2作为表达载体,以绿色荧光蛋白GFP作为报告蛋白,采用单因素的方法对简单节杆菌电转化条件的重要参数,如细胞生长阶段、细胞壁弱化剂处理条件、DNA质量和电击电压进行优化。结果表明,将细胞培养到对数生长初期(此时OD600=1.0),加入70 μg/mL的青霉素G处理1 h后制备感受态细胞,加入200 ng质粒DNA,在22 kV/cm的电压下进行电转化,得到的电转化效率最高,达到3.76X 104 cfu/μg DNA。将该优化后的电转化条件应用于球形节杆菌,电转化效率达到了 2.89 X 104 cfu/μg DNA。利用上述建立的电转化条件,以pART2质粒作为表达载体,将外源基因irrE(来自耐辐射异常球菌R1)分别在不同的宿主菌株(简单节杆菌和球形节杆菌)中进行异源表达。通过HIS纯化和Western Blot实验验证IrrE蛋白的成功表达。这说明上述电转化条件具有良好的应用效果。在此基础上,分别构建 pLJ1(pART2-P-ksdD)、pLJ2(pHY-p43-PCG100)、pLJ3(pMD19-T-Pcat-PCG100)三个表达载体,并连接gfp基因后电转化入简单节杆菌TCCC 11037中,通过观察转化子的生长情况和绿色荧光蛋白的表达情况分析这三个载体的功能。结果表明,pLJ1可以在简单节杆菌中进行复制,但不能表达;pLJ2和pLJ3均不能在简单节杆菌中进行复制。论文的研究成果为简单节杆菌遗传表达体系的优化和菌株的分子改造工作奠定了重要的基础。