论文部分内容阅读
目的：研究三七总皂甙能否抑制酒精诱导的骨髓基质干细胞(BMSCs)成脂分化，及其抑制效果与剂量的关系。 方法：从4周龄新西兰大白兔的股骨中抽取骨髓，用密度梯度离心法体外分离BMSCs，进行培养、传代，用倒臵相差显微镜观察细胞的形态生长规律。将第2代细胞传到6孔培养板中，随机分为空白组、模型组、高剂量治疗组、低剂量治疗组，每组10板。空白组：在每1ml培养液中加入生理盐水50μl进行诱导；模型组：在每1ml培养液中加入酒精（99.8％无水乙醇）50μl进行诱导；高、低剂量治疗组：在每1ml培养液中加入酒精50μl进行诱导成脂分化成功后，再分别加入三七总皂甙注射液100μl、50μl进行药物干预。对4组细胞在药物干预前后用倒臵相差显微镜观察形态变化，在诱导的第8天，每组取10孔细胞分别行油红O染色脂肪细胞计数、甘油三脂含量测定、碱性磷酸酶活性测定。在干预治疗的第15天，每组取10孔细胞分别行油红O染色后脂肪细胞计数、甘油三脂含量测定、碱性磷酸酶活性测定，成脂相关基因422(aP2)mRNA表达的检测。 结果：培养的细胞在倒臵相差显微镜下观察，细胞形态基本成梭形，集落呈漩涡状由中心向周围散射，符合BMSCs的生长规律和特性；在诱导的第8天，空白组油红 O染色脂肪细胞计数、甘油三酯含量分别为10.42±5.23个/cm2、1.16±0.01μg/孔，较之模型组的124.15±13.52个/cm2、4.21±0.02μg/孔为低，而 ALP的活性测定为43.06±4.52U/100mgpro，比模型组的10.02±3.37U/100mgpro明显增高，两组各指标的差异有统计学意义（P<0.05），这说明酒精诱导 BMSCs成脂分化的造模是成功的；三七总皂甙干预治疗15天后，高、低剂量治疗组油红 O染色脂肪细胞记数为28.72±17.89个/cm2、34.02±11.57个/cm2，甘油三酯含量测定分别为4.02±0.28μg/孔，4.83±0.11μg/孔，碱性磷酸酶活性测定分别为53.06±16.73U/100mgpro、47.08±13.54U/100mgpro，这两组间各指标的数据测定的差异有统计学意义（P<0.05），并且它们与模型组的油红 O染色脂肪细胞记数247.13±16.92个/cm2、甘油三酯含量9.96±0.21μg/孔、碱性磷酸酶活性测定29.02±13.37U/100mgpro相比有统计学意义（P<0.05）；而与空白组的油红O染色脂肪细胞记数21.42±12.25个/cm2，甘油三酯含量3.86±0.12μg/孔，碱性磷酸酶活性63.08±18.64U/100mgpro相比无统计学意义（P>0.05）。此外，通过凝胶成像系统对成脂基因422(aP2)mRNA扩增产物的分析表明，酒精组成脂基因表达水平数值为4.02±0.27，远高于高、低剂量治疗组、空白组的成脂基因表达水平2.01±0.28、2.16±0.12、1.94±0.21，经统计学分析P<0.05；其中低剂量治疗组的基因表达水平高于高剂量治疗组，统计学分析P<0.05；高、低剂量治疗组与空白组之间成脂基因表达水平的差异均无统计学意义，P>0.05。 结论：三七总皂甙能抑制酒精诱导的BMSCs成脂分化；抑制效果与三七总皂甙的剂量呈正相关。