【摘 要】
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背景:脑卒中是全世界第二大常见的死亡原因,其中,以缺血性脑卒中最为常见。小胶质细胞是中枢神经系统应答脑缺血/再灌注损伤的关键细胞效应因子,通过改变其激活状态来保护神经元,是中枢神经系统疾病有前景的治疗理念之一。PrPc是一种集中表达于中枢神经系统的膜糖蛋白,自噬是溶酶体依赖的蛋白质降解途径,最新研究发现,PrPc和自噬都能通过调控小胶质细胞表型,发挥神经保护作用。但目前为止,我们仍不清楚两者之间是
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背景:脑卒中是全世界第二大常见的死亡原因,其中,以缺血性脑卒中最为常见。小胶质细胞是中枢神经系统应答脑缺血/再灌注损伤的关键细胞效应因子,通过改变其激活状态来保护神经元,是中枢神经系统疾病有前景的治疗理念之一。PrPc是一种集中表达于中枢神经系统的膜糖蛋白,自噬是溶酶体依赖的蛋白质降解途径,最新研究发现,PrPc和自噬都能通过调控小胶质细胞表型,发挥神经保护作用。但目前为止,我们仍不清楚两者之间是否存在联系?这是本实验拟解决的科学问题。方法:选取若干只新生72小时内FVB背景乳鼠,包括WT（野生型）、KO（PrPC敲除,PRNP-/-）和TGA（PrPC过表达,PRNP+/+）,分离、培养、纯化新生小鼠大脑皮层小胶质细胞,构建糖氧剥夺/复糖复氧（OGD/R）模型,分别收集Normal组和OGD（2h）/R（24h,48h,72h）组小胶质细胞及细胞培养上清。通过流式细胞术和细胞因子微球检测技术检测不同基因型和处理组小胶质细胞表型分化以及促炎、抗炎因子的释放情况,观察OGD/R后PrPC与小胶质细胞表型转化之间的联系。与此同时,通过免疫荧光和Western Blotting技术检测不同基因型和处理组小胶质细胞自噬随时间变化趋势,观察OGD/R后PrPC与小胶质细胞自噬之间的联系。最后,通过添加自噬抑制剂,调控抑制自噬观察对应表型变化,探究PrPC、自噬及小胶质细胞表现转化间的联系。结果:1.OGD/R处理后,小胶质细胞自噬激活,小胶质细胞表型以M1型为主,自噬发生在表型转化之前;抑制自噬,小胶质细胞表型向主要M1型转化。WB结果显示,OGD/R处理后,自噬相关蛋白表达水平:LC3B增加（P<0.05）、P62下降（P<0.01）、LAMP1未见上升（P<0.05）,自噬激活,以OGD（2h）/R（24h）最明显。CBA及流式结果显示,OGD/R处理后,M1型小胶质细胞和IL-6显著增加（P<0.05）,以OGD（2h）/R（48h）最明显,M2型小胶质细胞和IL-10升高不明显。自噬抑制剂3-MA或Bafilomycin A1抑制了ODG/R后小胶质细胞自噬激活,小胶质细胞M1型比例显著增加（P<0.05）。2.OGD/R处理后,PrPC促进小胶质细胞自噬激活,PrPC促进小胶质细胞向M2型转化。WB结果示,OGD/R处理后,自噬相关蛋白表达水平:PRNP过表达组,LC3B增加（P<0.05）、P62下降（P<0.01）,LAMP1升高（P<0.05）,自噬激活;PRNP敲除组,LC3B下降（P<0.05）、P62升高（P<0.05）,LAMP1下降（P<0.05）,自噬抑制。CBA及流式细胞术结果显示,OGD/R处理后,PRNP过表达组,以M2型小胶质细胞比例和IL-10升高为主（P<0.05）;PRNP敲除组,以M1型小胶质细胞比例和IL-6升高为主（P<0.05）。3.OGD/R后,PrPC能通过促进小胶质细胞自噬激活,诱导小胶质细胞主要向M2型转化。WB结果示,自噬抑制剂Bafilomycin A1处理抑制了OGD/R后TGA小胶质细胞自噬激活（P<0.05）。CBA及流式结果显示,TGA型小胶质细胞向M2型转化受抑制（P<0.05）。结论:OGD/R损伤后,PrPC能通过促进小胶质细胞自噬诱导小胶质细胞向M2型转化。
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