【摘 要】
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应用噬菌体-生物分型方法能将01群霍乱弧菌El Tor型生物型(EVC)区分为流行株和非流行株.噬菌体VP1是其中一株霍乱弧菌分型噬菌体,已经在分子生物水平上进行了分析.其染色体为
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应用噬菌体-生物分型方法能将01群霍乱弧菌El Tor型生物型(EVC)区分为流行株和非流行株.噬菌体VP1是其中一株霍乱弧菌分型噬菌体,已经在分子生物水平上进行了分析.其染色体为环状双链DNA,共有49个开放读码框架,其中基因6预测为裂解蛋白基因.目前对大多数革兰阳性菌和革兰阴性菌的大噬菌体,只有一种裂解宿主细胞的方式,即需要至少两种噬菌体编码的具有裂解功能的蛋白(穿孔素和溶菌酶).穿孔素在细胞壁上形成允许溶菌酶到达作用部位的非特异的孔,但不依赖溶菌酶的裂解机制有多种形式,同时一些研究表明溶菌酶可以单独在细菌胞内、外裂解宿主菌.为探索VP1的裂解机制,本研究利用PCR技术扩增El Tor霍乱弧菌分型噬菌体的基因6-预测的裂解蛋白基因,用pET-30a(+)作为表达载体,通过比较特定生长状态的体外培养的其宿主保存菌种N53和另一菌株N16961中加入表达的裂解蛋白前后LB液体培养基中菌OD<,600>和菌落记数的变化,发现表达的裂解蛋白对宿主细胞外条件下可表现出一定的活性;通过IPTG诱导阳性克隆子电击转化的N53和N16961的生长曲线的变化,裂解蛋白在细胞内单独没有发现裂解活性.本项研究表明克隆表达的VP1裂解蛋白在霍乱弧菌细胞外和细胞内的裂解方式有不同,细胞外可以发挥一定的裂解作用,但在细胞内其单独表达没有裂解活性,需要其它机制的参与.
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