【摘 要】
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目的:结合临床伤口护理湿性愈合理论,研究去铁胺/壳聚糖水凝胶在小鼠深部组织压力性损伤中的治疗效果和作用机制。方法:根据文献制备去铁胺/壳聚糖水凝胶,考察水凝胶的形貌表征以及体外药物释放情况;选取SPF级C57BL/6雄性小鼠为研究对象,构建深部组织压力性损伤模型,采用随机数字法随机分为四组:模型组,壳聚糖组,去铁胺组,去铁胺/壳聚糖组,每组10只,治疗周期为14天。在相同条件下,使用数码相机记录小
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目的:结合临床伤口护理湿性愈合理论,研究去铁胺/壳聚糖水凝胶在小鼠深部组织压力性损伤中的治疗效果和作用机制。方法:根据文献制备去铁胺/壳聚糖水凝胶,考察水凝胶的形貌表征以及体外药物释放情况;选取SPF级C57BL/6雄性小鼠为研究对象,构建深部组织压力性损伤模型,采用随机数字法随机分为四组:模型组,壳聚糖组,去铁胺组,去铁胺/壳聚糖组,每组10只,治疗周期为14天。在相同条件下,使用数码相机记录小鼠伤口变化情况,计算伤口愈合率。利用普鲁士兰染色及电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定深部组织压力性损伤创面中铁离子含量。通过HE染色法评估皮肤肌肉组织细胞浸润程度,毛细血管以及皮肤附属器官再生情况。利用Western blot方法检测HIF-1α（缺氧诱导因子1α）、VEGF（血管内皮生长因子）、SDF-1（基质细胞衍生因子1）和TNF-α（肿瘤坏死因子α）蛋白表达量的变化。体外细胞实验检测去铁胺对Ha Ca T细胞内活性氧（ROS）水平的影响,通过流式细胞术检测去铁胺对RAW264.7巨噬细胞的极化作用。结果:1.成功制备去铁胺/壳聚糖水凝胶,体外药物释放结果显示,壳聚糖水凝胶可有效控制去铁胺的持续释放。2.动物实验:（1）ICP-MS与普鲁士蓝染色结果显示,模型组小鼠肌肉组织中游离铁离子浓度升高,出现了明显“铁蓄积”现象。去铁胺组中肌肉组织“铁蓄积”明显减少。（2）HE染色结果显示,去铁胺/壳聚糖组和去铁胺组中炎性细胞浸润程度显著降低（P<0.01）,血管和皮肤附属器官再生数目显著增多（P<0.01）,胶原沉积均匀且致密,连接性较好,与模型组相比具有显著的统计学差异。模型组出现了上皮过度增生和表皮增厚,去铁胺/壳聚糖组,去铁胺组和壳聚糖组上皮化程度适中,与正常组上皮化程度接近。（3）免疫组化染色结果显示,去铁胺/壳聚糖组中CD31阳性细胞表达率显著高于模型组和壳聚糖组（P<0.01）。（4）Western blot结果显示,去铁胺/壳聚糖组和去铁胺组中HIF-1α和VEGF蛋白表达显著升高,TNF-α蛋白表达显著降低,而去铁胺/壳聚糖组中SDF-1显著升高（P<0.01）。3.细胞实验:（1）ROS检测结果显示,经不同浓度去铁胺（10μMol/L,50μMol/L,100μMol/L）预处理1h和2h后,Ha Ca T细胞内ROS表达水平显著减少,与阳性对照组相比具有统计学差异（P<0.01）。（2）流式细胞术检测结果显示,去铁胺（50μol/L,100μMol/L,200μMol/L）诱导的F4/80+/CD206+（M2）巨噬细胞占比分别为15.47±0.89%、20.93±0.97%和29.72±1.84%;F480+/CD86+（M1）巨噬细胞占比分别为18.7±0.75%、15.6±0.71%和12.0±1.11%,呈现递减趋势。结论:1.深部组织压力性损伤肌肉组织中游离铁离子浓度升高,出现“铁蓄积”现象,去铁胺可有效地抑制铁离子的异常沉积。2.去铁胺/壳聚糖水凝胶通过稳定HIF-1α,促进VEGF和SDF-1表达,抑制HaCaT细胞内ROS生成,调控巨噬细胞向M2型极化,降低炎性细胞浸润,促进肉芽组织再生,加速伤口愈合。
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