【摘 要】
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野生动物妊娠诊断以及性别鉴定有助于准确计算雌性生殖率和性比,而这对于建立种群增长模型以及进行生存力分析至关重要。但是目前还没有一种简单,快速,准确的妊娠诊断和性别鉴定技术应用于非人灵长类。本研究利用糖组学凝集素芯片以及质谱技术鉴定黑叶猴妊娠与性别尿液糖蛋白糖型差异。利用川金丝猴进一步验证此种方法是否适用于其他非人灵长类,以此来评估尿液糖蛋白糖型作为非人灵长类妊娠诊断和性别鉴定潜在生物标志物的可行性
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野生动物妊娠诊断以及性别鉴定有助于准确计算雌性生殖率和性比,而这对于建立种群增长模型以及进行生存力分析至关重要。但是目前还没有一种简单,快速,准确的妊娠诊断和性别鉴定技术应用于非人灵长类。本研究利用糖组学凝集素芯片以及质谱技术鉴定黑叶猴妊娠与性别尿液糖蛋白糖型差异。利用川金丝猴进一步验证此种方法是否适用于其他非人灵长类,以此来评估尿液糖蛋白糖型作为非人灵长类妊娠诊断和性别鉴定潜在生物标志物的可行性。首先利用凝集素芯片技术鉴定黑叶猴妊娠雌性（5例）与非妊娠雌性(包括非妊娠雌性（10例）和分娩后雌性（4例）,雌性与雄性（10例）组间尿液糖蛋白糖型差异。其次,针对黑叶猴妊娠雌性与非妊娠雌性,雌性与雄性,分别筛选出凝集素STL、SBA,借助MALDI-TOF-MS技术鉴定完整N-糖链结构,用来研究相关N-糖链变化情况。最后,结合川金丝猴糖蛋白糖型研究结果,分别筛选出凝集素BS-I、MAL-I,利用相同的方法鉴定川金丝猴妊娠雌性与非妊娠雌性,雌性与雄性相关N-糖链变化情况。（1）糖蛋白糖型研究结果显示:在黑叶猴中,凝集素STL在妊娠雌性中表达较高,凝集素PTL-I、PNA、SNA在非妊娠雌性中表达较高,凝集素Jacalin、BS-I、SBA在雌性中表达较高。（2）两种非人灵长类妊娠诊断N-糖链研究结果显示:妊娠雌性中所检出的差异凝集素所识别的N-糖链结构多于非妊娠雌性,而且妊娠雌性中唾液酸化N-糖链多于非妊娠雌性,ratio值>1.5。黑叶猴中16种N-糖链（m/z 1079.375,1316.630,1589.545等）只出现在妊娠雌性中,而3种N-糖链（m/z 1095.370,1479.547,1641.599）只出现在非妊娠雌性中;m/z 1584.578,1606.560注释的N-糖链在妊娠雌性中相对丰度高于非妊娠雌性,ratio值>1.5。川金丝猴中19种N-糖链（m/z 1707.658,1729.616,1751.597等）只出现在妊娠雌性中,7种N-糖链（m/z 1501.529,1542.555,1549.538等）只出现在非妊娠雌性中;11种N-糖链（m/z为1515.508,1622.555,1762.583等）在妊娠雌性中相对丰度高于非妊娠雌性,ratio值>1.5,3种N-糖链（m/z为1606.560,1730.636,2412.890）在妊娠雌性中相对丰度低于非妊娠雌性,ratio值<0.67。（3）两种非人灵长类性别鉴定N-糖链研究结果显示:黑叶猴雌性中所检出的N-糖链结构多于雄性;11种N-糖链（m/z 1460.502,1751.597,1770.642等）只出现在雌性中,6种N-糖链（m/z 1704.608,1793.644,1812.653等）只出现雄性中;5种N-糖链（m/z 1606.560,1647.587,2021.731等）在雌性中相对丰度高于雄性,ratio值>1.5,m/z1743.538注释的N-糖链在雌性中相对丰度低于雄性,ratio值<0.67。川金丝猴中m/z1438.520,1752.618注释的N-糖链只出现在雄性组中;m/z 1905.548注释的N-糖链在雌性中的相对丰度高于雄性,ratio值>1.5。在黑叶猴妊娠诊断与性别鉴定研究中,差异凝集素所识别的N-糖链在糖链数量、糖链种类、糖链结构、相对丰度以及唾液酸化和岩藻糖基化程度等方面存在相应的差异,而川金丝猴中也表现出相同的变化。说明尿液糖蛋白糖型有作为非人灵长类妊娠诊断和性别鉴定潜在生物标志物的可行性,说明糖组学方法可以用来表征妊娠以及性别,这将为非人灵长类妊娠诊断以及性别鉴定提供参考。
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