南洋楹枝枯病病原鉴定及其药剂筛选

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南洋楹(Paraserianthes falcataria)是世界上著名的热带速生用材树种,经济价值和景观价值高,也是改良土壤的优良树种。广东省增城和惠州已建成我国最大的南洋楹木材基地。近两年,据当地林农反映,南洋楹枯死病害较普遍发生,造成经济损失。本研究对博罗和惠东南洋楹种植区进行病样采集,通过组织分离、纯化,获得优势病原菌菌株,对枝枯病病害的病原进行鉴定、快速分子检测和药剂筛选的研究,研究结果可为南洋楹的健康生产和病害防控提供重要的理论依据和实践参考。主要研究结果如下:1、通过病害鉴定,发现一种新病害-南洋楹枝枯病。该病害的典型症状是病树早期茎干上有暗褐色病斑,后期病斑纵裂,病部常聚生橘红色颗粒状的子实体,枝干干枯,植株生长不良,严重时整株枯死。对病组织进行分离、纯化,获得一种优势病原菌,对优势病原菌代表菌株BL1610和HD1509进行形态鉴定和基于肌动蛋白(actin,ACT)、组蛋白H3(histone H3,HIS3)、核糖体转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、翻译延伸因子-1α蛋白(the translation elongation factor 1-alpha,TEF-1α)和β-微管蛋白(β-tubulin,TUB)基因的分子鉴定,将代表菌株鉴定为皱赤壳(Rugonectria rugulosa)。通过基于ITS、TUB和TEF的序列构建进化树,分析表明代表菌株归属R.rugulosa。采用伤口接种法,利用代表菌株BL1610和HD1509对南洋楹健康的离体枝条和6月生的树苗进行致病性检测,接种病原菌的处理均发病,表现出与林间发病相似的症状,从发病病部再分离的病原菌经鉴定与接种的病原菌相一致,完成了柯赫验证,表明R.rugulosa引致南洋楹枝枯病的发生。2、基于南洋楹枝枯病菌代表菌株BL1610和HD1509的ITS保守序列,利用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物(ITS-36F/ITS-324R),建立了特异、灵敏、快速的南洋楹枝枯病菌巢式PCR的检测体系,对该体系进行优化,该体系最佳反应条件为退火温度63℃、反应循环数35个,可检测的DNA模板最低质量浓度为1 fg/L。3、以南洋楹枝枯病菌代表菌株BL1610和HD1509为靶标菌,采用菌丝生长抑制法进行药剂筛选,结果表明,咪鲜胺和多菌灵抑菌效果显著,咪鲜胺EC50值为0.8030.829 mg/L,多菌灵EC50值为1.0211.239 mg/L,可为进一步进行南洋楹病害的林间药效试验及化学防治提供用药参考。
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