【背景及目的】肺癌已成为我国及全球范围内癌症死亡的首要病因，它的常见并发症之一是恶性胸腔积液（malignant pleural effusion，MPE），严重影响患者的生活质量和生存期。目前MPE治疗主要为姑息性对症治疗，主要治疗方法有胸胸腔内留置引流管[1]、局部注射化疗药物[2]等，但这些方法可引起局部胸痛、发热等副反应，且治疗后易复发。近年研究表明MPE发病主要与肿瘤血管生成、胸膜血管通透性增加和肿瘤炎症反应等密切相关[3]，而血管内皮生成因子[4]（Vascular endothelial cell growth factor，VEGF）、核转录因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）[5]等生物大分子在MPE形成过程中具有重要作用，由此积极寻找MPE的分子生物学治疗靶点也成为近年研究的热点。前期研究已证实VEGF单克隆抗体贝伐单抗[6]、NF-κB抑制剂硼替佐米[7]等分子靶向药物治疗MPE效果明显，但其价格昂贵，限制其广泛应用，因而临床迫切需要低毒、经济的有效治疗药物。祖国传统中药三氧化二砷（As₂O₃）最早用于治疗急性早幼粒细胞白血病[8,9（]APL），具有高效、低毒等特点。我们前期临床应用As₂O₃胸腔注射治疗肺癌伴发的恶性胸腔积液，结果示胸水生成速度明显减缓，由血性变为非血性[10]。Miller^[11]等报道As₂O₃可与IκB激酶（IKK）催化亚基IKKα/β上Cys-179残基结合，从而阻断IκB磷酸化，抑制NF-κB的活性。故我们推测：前期观察到的As₂O₃对MPE治疗作用的可能机制是通过抑制肿瘤细胞NF-κB的活性来减少VEGF-A的表达。我们拟建立小鼠肺癌胸膜转移胸腔积液模型，采用As₂O₃胸腔注射干预，观察小鼠胸水体积、胸膜血管通透性和血管密度改变；检测胸膜肿瘤结节中NF-κB活性，胸水及肿瘤结节中VEGF-A、TNF-α mRNA及蛋白水平表达变化，初步阐明As₂O₃对MPE治疗作用的机理。【内容及方法】第一部分C57BL/6小鼠Lewis肺癌胸膜移植瘤胸腔积液模型的建立小鼠胸腔内注射Lewis肺癌细胞1×106cells/mouse，建模后14天行小鼠胸部CT探查有无MPE形成。第二部分三氧化二砷对C57BL/6小鼠Lewis肺癌胸膜移植瘤胸腔积液作用机理的研究C57BL/6小鼠Lewis肺癌胸膜移植瘤胸腔积液模型80只，随机分为5组，每组16只：A组：模型对照组：胸腔注射NS0.01ml/10g﹒d；B组：As₂O₃2.5mg/kg组：胸腔注射As₂O₃2.5mg/kg﹒d；C组：As₂O₃5mg/kg组：胸腔注射As₂O₃5mg/kg﹒d；D组：博莱霉素组：胸腔注射盐酸博莱霉素15mg/kg﹒d；E组：硼替佐米组：胸腔注射腹腔注射硼替佐米0.1mg/kg﹒d；每组均连续用药7天。1.第8天每组任取8只小鼠，予尾静脉注射200μl浓度为50mg/ml Evans’blue溶液，1小时后乙醚麻醉后解剖小鼠，收集血液及胸水，用酶标仪测量其在波长630nm下胸水及血液上清的吸光度，并以已知浓度的标准Evans’blue为参照，计算并比较各组胸水Evans’blue浓度，并计算胸水/血清Evans’blue浓度。2.第8天其余小鼠乙醚麻醉后解剖，收集MPE、胸腔肿瘤组织，测量MPE体积，检测肿瘤微血管密度、胸膜肿瘤结节VEGF-A、TNF-αmRNA及其蛋白表达水平、NF-κB活性。3.数据采用SPSS18.0统计软件包进行分析，结果以x±SD表示。多组间采用One-Way ANOVA分析，方差非齐性则采用非参数检验；P<0.05为具有显著性差异。【研究结果】1.本研究建模成功率100%；2.各实验组MPE体积较对照组（0.906ml）均显著减少（P<0.05），其中As₂O₃5mg/kg组（0.089ml）最少，显著少于As₂O₃2.5mg/kg组（0.579ml）、硼替佐米组（0.579ml）及博莱霉素组（0.600ml）（P均<0.05），As₂O₃2.5mg/kg组与硼替佐米组、博莱霉素组无显著差异（P>0.05）。3.MPE中Evans’blue浓度各实验组均显著低于对照组（1.844mg/ml）（P均<0.05）；As₂O₃5mg/kg组（0.344mg/ml）显著少于As₂O₃2.5mg/kg组（1.002mg/ml）、硼替佐米组（0.655mg/ml）和博莱霉素组（1.201mg/ml）（P均<0.05）；硼替佐米组显著少于As₂O₃2.5mg/kg组和博莱霉素组（P均<0.05）；但As₂O₃2.5mg/kg组与博莱霉素组无显著差异（P>0.05）。4.免疫组织化学CD31、CD34染色结果显示：各实验组肿瘤微血管密度（MVD）均较对照组（CD31/CD34：200±12/191±9）显著下降（P<0.05）。CD31结果示As₂O₃2.5mg/kg组、硼替佐米组和博莱霉素组MVD值分别为（92±7）、（45±2）和（113±5），各组间比较无显著差异（P均>0.05）；CD34结果示：As₂O₃2.5mg/kg组、硼替佐米组和博莱霉素组MVD值分别为（60±5）、（30±3）和（115±7），各组间比较无显著差异（P>0.05）。5.各实验组MPE中VEGF-A表达水平较对照组（2990.94pg/ml）显著降低（P<0.05），实验组中以As₂O₃5mg/kg组（110.28pg/ml）最低，博莱霉素组（1603.17pg/ml）最高，As₂O₃2.5mg/kg组（535.16pg/ml）和硼替佐米组（555.92pg/ml）表达水平相近，但各组间比较均无统计学差异（P均>0.05）。6.各实验组MPE中TNF-α表达水平较对照组（39.51pg/ml）显著降低（P<0.05），实验组中以As₂O₃5mg/kg组（1.62pg/ml）最低，博莱霉素组（20.19pg/ml）最高，As₂O₃2.5mg/kg组（8.69pg/ml）和硼替佐米组（6.59pg/ml）相近，但各实验组间比较均无统计学差异（P>0.05）。7.各实验组胸膜肿瘤结节VEGF-A、TNF-αmRNA表达水平均较对照组（1，1）显著降低（P<0.05），以As₂O₃5mg/kg组（0.094，0.057）最低，博莱霉素组（0.521，0.500）最高，As₂O₃2.5mg/kg组为（0.135，0.140）、硼替佐米组为（0.511，0.171）、各组间比较无统计学差异（P>0.05）。8.Western blot结果示：各实验组胸膜肿瘤结节VEGF-A、TNF-α蛋白表达水平均较对照组降低，以As₂O₃5mg/kg最低。9.EMSA结果示：各实验组肿瘤结节NF-κB活性与对照组相比减弱，以As₂O₃5mg/kg最弱。结果提示：As₂O₃通过降低肿瘤细胞NF-κB的活性，抑制TNF-α转录和表达，从而减少VEGF-A的转录和表达，达到减少胸膜肿瘤血管生成和降低胸膜血管通透性，减少MPE形成的作用，其作用随浓度增加而增强。【结论】1、C57BL/6小鼠胸腔内注射Lewis肺癌细胞建立小鼠肺癌胸膜移植瘤胸腔积液模型简单易行，成模率高。2、As₂O₃胸腔内注射可以减少MPE的形成。3、As₂O₃作用与NF-κB活性抑制剂硼替佐米相似，且其作用随浓度增加而增强。