雷公藤红素对卵巢癌细胞增殖及焦亡的影响及作用机制研究

来源 :锦州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:n19851020
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目的探讨雷公藤红素对人卵巢癌细胞株HEYa8增殖生长及焦亡的影响及其机制。方法使用噻唑蓝法(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)试验法测不同浓度(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、1.2和2.4mg/L)及不同时间(12h、24h、36h、48h和72h)雷公藤红素对HEYa8细胞生长的影响情况,并分析出最适作用浓度及时间;根据MTT结果,将HEYa8细胞随机分为:雷公藤红素组(0.4mg/L,培养24h)和对照组(未做处理)。Transwell法检测两组细胞的生长迁移情况,利用秋水仙素处理后检测两组细胞的细胞指数情况,利用细胞计数仪检测两组细胞数量;利用Western blot方法检测蛋白:GSDMS-N、Caspase 1、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18、PI3K及AKT,并用免疫荧光双标方法检测CD44/GSDMS-N双阳性细胞比率;最后,利用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)分别检测HEYa8细胞中NLRP3、IL-1β、ASC及Caspase 1的m RNA含量。结果在浓度为0.4mg/L和培养24h时,雷公藤红素效果最佳;与对照组相比,雷公藤红素组中HEYa8细胞的迁移数量、分裂指数及细胞计数都降低(P<0.05);并且雷公藤红素组的焦亡相关蛋白均表达升高(P<0.05);同时胞内磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(PKB Protein Kinase,AKT)信号通路被抑制(P<0.05);利用促生长因子(somatomedin C,IGF-1,PI3K特异性激动剂)激活此通路,我们发现细胞焦亡水平降低(P<0.05)。结论雷公藤红素能够抑制HEYa8细胞生长并诱导细胞焦亡,其分子机制可能与PI3K/AKT信号通路被抑制有关。
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