背景与目的:肝脏恶性肿瘤是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病率和致死率均处于前4的水平。主要包含肝细胞肝癌(HCC)、肝内胆管细胞癌(ICC)、肝细胞癌-肝内胆管癌(HCC-ICC)。ICC发病较为隐匿,缺乏典型临床症状,手术是ICC目前首选的治疗方案,但由于其发现时多处于晚期,难以根治性切除,预后差。所以化疗是其重要的治疗手段,但ICC对化疗药物通常不敏感,且易出现化疗耐药,影响患者预后。肿瘤耐药包括原药耐药(PDR)及多药耐药(MDR),而MDR在肿瘤细胞防御化疗药物攻击中起主要作用。MDR中MDR1控制的膜糖蛋白P-糖蛋白(P-gp)介导的药物外排机制有着尤为重要的作用。研究表明,MDR1在ICC组织中高表达,且在ICC化疗耐药过程中发挥重要作用,但其具体的机制尚不明确。代谢异常是肿瘤细胞的一项重要特征。谷氨酰胺作为有氧糖酵解主要底物被异常代谢的肿瘤细胞大量消耗,因而谷氨酰胺在肿瘤代谢过程中起到了尤为重要的作用。另外,在肿瘤化疗耐药方面,谷氨酰胺酶可通过促进核苷酸的合成以降低肿瘤细胞对顺铂的敏感性。其中,肝型谷氨酰胺酶(GLS2)是谷氨酰胺酶的一种,在肿瘤代谢过程中发挥重要作用,这提示GLS2可能与ICC化疗耐药密切相关,因此研究GLS2与ICC化疗耐药具有重要意义。本研究旨在探讨GLS2在ICC中的化疗耐药的作用及其潜在机制。方法:首先,通过UALCN在线分析工具在生物信息数据库中检索ICC中GLS2、MDR1表达水平及两者的相关性。运用Western blot、免疫组化临床进一步验证40例ICC组织、癌旁组织GLS2和MDR1表达水平及两者相关性并分析,GLS2表达水平与临床病理因素及患者预后之间的相关性。然后,过表达RBE细胞GLS2表达,Western blot验证过表达效率。之后使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测过表达GLS2细胞及NC细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的化疗敏感性。最后,Western blot检测过表达GLS2的ICC细胞及NC细胞MDR1的表达,初步阐明GLS2调控ICC化疗耐药潜在分子机制。结果:1、数据库分析结果显示在ICC癌组织中GLS2表达水平显著低于正常肝组织,而MDR1表达水平显著高于正常肝组织,并且GLS2表达与MDR1表达呈负相关。进一步Western blot和免疫组化验证,可以得到与之前一致的结果。GLS2蛋白表达与肿瘤数量、包膜、淋巴结转移、临床分期有关,GLS2表达越高,ICC患者预后越好。2、上调RBE细胞GLS2表达后,可显著提高RBE细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性。3、上调RBE细胞GLS2表达后可显著降低MDR1表达。结论:GLS2通过介导MDR1表达提高ICC细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性化疗敏感性,并且GLS2的表达越高提示患者预后越好。