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目的:探讨细胞色素P450 2E1(CYP2E1)基因调控酒精游离脂肪酸协同增效性脂肪性肝炎巨噬细胞代谢重编程的分子机制。方法:1建立CYP2E1过表达的酒精性肝炎细胞模型,非酒精性脂肪性肝炎细胞模型,酒精和游离脂肪酸协同增效性肝炎细胞模型、M1型极化型细胞模型、M2型极化型细胞模型,以空载CYP2E1细胞作为对照。在CYP2E1过表达(OE)细胞系和空载(NC)细胞系中各分6组,即空白对照组、酒精处理组、油酸处理组、酒精加油酸处理组、LPS+IFN-γ处理组、IL-4处理组。2在细胞模型建立3h后,采用RT-qPCR技术检测CYP2E1基因、极化标志基因以及炎症细胞因子的表达水平,采用激光共聚焦技术和流式细胞技术检测活性氧(ROS)产生水平,采用NO试剂盒检测胞内、胞外NO产生水平。3在细胞模型建立24h后,采用RT-qPCR技术检测糖代谢通路关键节点酶基因表达水平,采用GC-MS技术检测胞内葡萄糖代谢产物含量。结果:1成功建立酒精和游离脂肪酸协同增效性肝炎细胞模型、M1型极化型细胞模型、M2型极化型细胞模型,各模型炎症标志基因表达水平显著高于空白对照组(p<0.05),ROS产生水平显著高于空白对照组(p<0.05)。2在糖代谢通路中,酒精促进OE细胞pgd表达上调(p<0.05),促进NC细胞Irg1、ASS1表达上调(p<0.05);油酸促进OE细胞IDH1、IDH2、GPX1、Irg1、Gsr、Got1/2、ASS1表达上调(p<0.05),促进NC细胞Irg1、Gsr、ASS1表达上调(p<0.05),IDH1、NOX2表达下调(p<0.05);酒精加油酸促进OE细胞IDH1、IDH2表达下调(p<0.05),Irg1、Gsr、Got1/2、ASS1表达上调(p<0.05),促进NC细胞Irg1、Gsr、ASS1表达上调(p<0.05)。3 GC-MS胞内葡萄糖代谢产物检测结果显示,油酸、酒精加油酸促进NC细胞3-磷酸甘油酸水平下调(p<0.05),而对OE细胞无此效应;油酸促进NC细胞丙酮酸水平显著下调(p<0.01),而对OE细胞下调不明显;酒精、油酸、酒精加油酸均能刺激OE、NC细胞琥珀酸水平下调(p<0.05);酒精促进NC细胞延胡索酸、苹果酸水平上调(p<0.05),而对OE细胞无此效果。对比NC、OE细胞对照组,CYP2E1能促进3-磷酸甘油酸水平下调(p<0.05),丙酮酸、柠檬酸、α-酮戊二酸、延胡索酸、苹果酸、乳酸水平上调(p<0.05)。结论:1酒精和游离脂肪酸分别独立与CYP2E1基因存在交互式促进作用,且二者能协同促进CYP2E1表达。2酒精与游离脂肪酸均能单独刺激巨噬细胞分泌促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、HIF-1α,且在CYP2E1基因的影响下,巨噬细胞分泌这些促炎性细胞因子的能力进一步增强。3 CYP2E1基因参与ROS的生成,在引发氧化应激和脂质过氧化反应中发挥重要作用,并且可能同时参与氮化应激。4在游离脂肪酸的介入下,CYP2E1基因可能改变了调控巨噬细胞向M1型极化时的代谢途径,出现代谢重编程。5巨噬细胞可能在CYP2E1基因的正向调节和酒精与游离脂肪酸协同作用下,通过增强无氧糖酵解、磷酸戊糖途径和天冬氨酸-精氨酸旁路的代谢作用,快速地促进巨噬细胞向M1型方向极化。