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目的：
自建微阵列化学发光免疫分析法定量检测血清中的抗CarP抗体，评价抗CarP抗体在正常健康对照、类风湿关节炎（RA）、其他自身免疫性疾病和非自身免疫性疾病中的变化及其临床应用价值。
方法：
本研究分为两个部分。
第一部分：自建一种基于微阵列蛋白芯片技术的化学发光免疫分析法，全自动定量检测血清中抗CarP-IgG抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体。对自建检测方法的分析性能进行评价。以120例健康对照人群血清抗CarP抗体水平的第95分位为临界值，研究87例RA组、58例非RA组抗CarP-IgG抗体水平及阳性率；分析RA组抗CarP-IgG抗体与疾病活动性指标间的关联性。血清CRP、IgG和RF水平测定采用散射免疫比浊法；抗CCP抗体测定采用间接ELISA法；ESR采用红外线障碍法；白细胞计数检测采用全自动血细胞分析仪。采用免疫印迹法和竞争抑制试验验证检测抗CarP-IgG抗体的特异性。
第二部分：共研究806例正常对照和患者血清，研究对象：表观健康体检者120例、RA患者420例、SLE患者42例、干燥综合征33例、骨关节炎63例、关节痛43例、未分化结缔组织病27例、其他自身免疫性疾病37例、其他非自身免疫性疾病 21 例。本研究获长海医院医学伦理委员会批准实施，所有患者均知情同意。采用自建的微阵列蛋白芯片技术的化学发光免疫分析法定量测定血清抗 CarP-IgG 抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体水平。
统计学分析：非正态分布的计量资料以中位数（四分位数）表示，正态分布的计量资料以?(X)±S表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料用例数（率或构成比）表示，组间比较采用 χ2检验，期望计数小于 5 时，采用连续校正 χ2检验。采用二元 logistic 回归分析，计算联合预测因子，利用联合因子制作联合诊断ROC曲线。两组变量之间相关性分析采用Spearman相关性分析，相关系数（r）0.4以下是弱相关，0.4~0.7是中等相关，0.7以上是强相关。以P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著性意义。采用SPSS20.0统计软件进行分析。
结果：
第一部分：自建的检测方法检测抗CarP抗体的重复性和中间精密度均＜15%；线性范围宽；LoB为0.70 ~1.0AU/mL；LoD为2.35~3.31 AU/mL；抗CarP抗体与抗CCP抗体几乎不存在交叉反应。制备好的蛋白芯片在4~8℃保存可稳定14天。以20 AU/mL作为临界值，参考区间＜20 AU/mL。与健康对照组相比，RA组、抗CCP抗体阳性RA组、关节痛组和未分化结缔组织病组患者抗CarP-IgG抗体水平显著升高。与正常对照组抗 CarP-IgG 抗体 5%阳性率相比，RA 患者的阳性率达28.21%，抗CCP抗体阳性RA组阳性率达32.2%；关节痛组阳性率为38.89%，均显著升高；其余疾病组间则无统计学差异。RA患者抗CarP-IgG抗体水平与类风湿因子（RF）水平和血沉（ESR）均呈弱相关，与CRP和IgG水平均呈中等相关。
第二部分：
1、健康对照组和疾病各组抗CarP-IgG抗体阳性率和水平的比较：
与健康对照组相比，RA组（包括抗CCP抗体阳性RA组、抗CCP抗体阴性RA组、抗CCP抗体阴性活动期RA组、抗CCP抗体阴性稳定期RA组）、干燥综合征、关节痛组、其他自身免疫疾病组、SLE组、未分化结缔组织病组患者血清抗CarP-IgG抗体阳性率和水平均显著升高，其余无显著差异。RA组抗CarP-IgG抗体阳性率和水平显著高于骨关节炎组，与其余疾病组相比无显著差异。抗 CCP 抗体阴性活动期RA组血清抗CarP-IgG抗体阳性率和水平显著高于其他RA各组。
2、健康对照组和疾病各组抗CarP-IgM抗体阳性率和水平的比较：
与健康对照组相比，RA组（包括抗CCP抗体阳性RA组、抗CCP抗体阴性活动期RA组和抗CCP抗体阴性RA组）、关节痛组、其他自身免疫疾病组、SLE组患者血清抗 CarP-IgM 抗体阳性率和水平均显著升高，其余无显著差异。RA 组抗CarP-IgM抗体阳性率和水平显著高于骨关节炎组、干燥综合征组，与其余疾病组相比无显著差异。抗CCP抗体阴性活动期RA组患者血清抗CarP-IgM抗体水平均显著高于其他RA组，但阳性率仅与抗CCP抗体阴性稳定期RA组有统计学差异。
3、健康对照组和疾病各组抗CarP-IgA抗体阳性率和水平的比较：
与健康对照组相比，RA组（包括抗CCP抗体阴性RA组、抗CCP抗体阴性活动期RA组和抗CCP抗体阳性RA组）、关节痛组、其他自身免疫疾病组和干燥综合征组患者血清抗CarP-IgA抗体阳性率和水平均显著升高，其余无显著差异。RA组抗 CarP-IgA 抗体阳性率和水平显著高于骨关节炎组、干燥综合征组、未分化结缔组织病组和其他自身免疫疾病组，与其余疾病组相比无显著差异。抗 CCP 抗体阴性活动期RA组抗CarP-IgA抗体阳性率阳性率显著高于其他RA组，但水平仅与抗CCP抗体阳性RA组有统计学差异。
4、RA患者血清抗CarP抗体水平与疾病活动性指标的相关性：
抗CarP-IgG抗体水平与抗CCP抗体、RF、WBC计数间无明显相关性；与CRP水平和ESR均呈弱相关，r分别为0.15和0.25；与血清IgG水平呈中等相关，r为0.41。抗CarP-IgM抗体水平与抗CCP抗体、IgG水平和WBC计数间无明显相关性；与RF、CRP水平和ESR均呈弱相关，r分别为0.20、0.27、0.15。
抗CarP-IgA抗体水平与抗CCP抗体、WBC计数间无明显相关性，与RF、CRP、ESR和IgG水平均呈弱相关，r分别为0.18、0.17、0.18、0.17。
5、RA患者血清抗CarP抗体与DAS28评分的关系：
DAS28评分为疾病重度活动、中度活动的RA患者血清抗CarP-IgG抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体阳性率和水平均显著升高，高于疾病轻度活动和临床缓解患者，亦显著高于健康对照组。疾病中度活动患者抗 CarP-IgG 抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体阳性率和水平均高于临床缓解患者。
6、RA患者血清抗CarP抗体与影像学关节损伤的关系：
影像学（X线）骨和关节损伤Ⅳ期RA患者血清抗CarP-IgG抗体、抗CarP-IgM抗体和抗 CarP-IgA 抗体阳性率和水平均显著升高，高于Ⅰ和/或Ⅱ期。由于具有影像学资料的RA患者仅108例，每个分组的病例数较少，血清抗CarP抗体阳性的例数更少，使用连续连续校正 χ2检验，Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期间 RA 患者血清抗 CarP-IgG抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体阳性率和水平的比较部分无统计学差异。
7、血清抗CarP抗体单独和联合RF及/或抗CCP抗体对RA 的诊断效能：
以420例RA患者和120例健康对照及84例非自身免疫性疾病患者组成的对照组分析抗CarP抗体单独和联合RF及/或抗CCP抗体对RA 的诊断效能（表1~2）。
结论：
自建定量测定血清抗 CarP 抗体的微阵列化学发光免疫分析法具有较好的敏感性和特异性，精密度和线性范围等可初步满足临床检测的需求。RA 患者，尤其是疾病高度活动及影像学有明显骨质损伤患者血清抗 CarP 抗体水平和阳性率均显著升高，在 RA 患者血清抗 CarP 抗体水平与疾病活动性指标呈一定的相关性，提示血清抗 CarP 抗体可以作为 RA 疾病活动性和骨质损伤的辅助评价指标，具有较好的临床应用价值。在其他自身免疫性疾病中也存在一定比例的血清抗 CarP 抗体。血清抗CarP抗体对RA诊断的敏感性不高，但具有较高的特异性；如果和RF及抗CCP抗体联合检测，可以显著提高对RA的诊断性能。
自建微阵列化学发光免疫分析法定量检测血清中的抗CarP抗体，评价抗CarP抗体在正常健康对照、类风湿关节炎（RA）、其他自身免疫性疾病和非自身免疫性疾病中的变化及其临床应用价值。
方法：
本研究分为两个部分。
第一部分：自建一种基于微阵列蛋白芯片技术的化学发光免疫分析法，全自动定量检测血清中抗CarP-IgG抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体。对自建检测方法的分析性能进行评价。以120例健康对照人群血清抗CarP抗体水平的第95分位为临界值，研究87例RA组、58例非RA组抗CarP-IgG抗体水平及阳性率；分析RA组抗CarP-IgG抗体与疾病活动性指标间的关联性。血清CRP、IgG和RF水平测定采用散射免疫比浊法；抗CCP抗体测定采用间接ELISA法；ESR采用红外线障碍法；白细胞计数检测采用全自动血细胞分析仪。采用免疫印迹法和竞争抑制试验验证检测抗CarP-IgG抗体的特异性。
第二部分：共研究806例正常对照和患者血清，研究对象：表观健康体检者120例、RA患者420例、SLE患者42例、干燥综合征33例、骨关节炎63例、关节痛43例、未分化结缔组织病27例、其他自身免疫性疾病37例、其他非自身免疫性疾病 21 例。本研究获长海医院医学伦理委员会批准实施，所有患者均知情同意。采用自建的微阵列蛋白芯片技术的化学发光免疫分析法定量测定血清抗 CarP-IgG 抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体水平。
统计学分析：非正态分布的计量资料以中位数（四分位数）表示，正态分布的计量资料以?(X)±S表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料用例数（率或构成比）表示，组间比较采用 χ2检验，期望计数小于 5 时，采用连续校正 χ2检验。采用二元 logistic 回归分析，计算联合预测因子，利用联合因子制作联合诊断ROC曲线。两组变量之间相关性分析采用Spearman相关性分析，相关系数（r）0.4以下是弱相关，0.4~0.7是中等相关，0.7以上是强相关。以P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著性意义。采用SPSS20.0统计软件进行分析。
结果：
第一部分：自建的检测方法检测抗CarP抗体的重复性和中间精密度均＜15%；线性范围宽；LoB为0.70 ~1.0AU/mL；LoD为2.35~3.31 AU/mL；抗CarP抗体与抗CCP抗体几乎不存在交叉反应。制备好的蛋白芯片在4~8℃保存可稳定14天。以20 AU/mL作为临界值，参考区间＜20 AU/mL。与健康对照组相比，RA组、抗CCP抗体阳性RA组、关节痛组和未分化结缔组织病组患者抗CarP-IgG抗体水平显著升高。与正常对照组抗 CarP-IgG 抗体 5%阳性率相比，RA 患者的阳性率达28.21%，抗CCP抗体阳性RA组阳性率达32.2%；关节痛组阳性率为38.89%，均显著升高；其余疾病组间则无统计学差异。RA患者抗CarP-IgG抗体水平与类风湿因子（RF）水平和血沉（ESR）均呈弱相关，与CRP和IgG水平均呈中等相关。
第二部分：
1、健康对照组和疾病各组抗CarP-IgG抗体阳性率和水平的比较：
与健康对照组相比，RA组（包括抗CCP抗体阳性RA组、抗CCP抗体阴性RA组、抗CCP抗体阴性活动期RA组、抗CCP抗体阴性稳定期RA组）、干燥综合征、关节痛组、其他自身免疫疾病组、SLE组、未分化结缔组织病组患者血清抗CarP-IgG抗体阳性率和水平均显著升高，其余无显著差异。RA组抗CarP-IgG抗体阳性率和水平显著高于骨关节炎组，与其余疾病组相比无显著差异。抗 CCP 抗体阴性活动期RA组血清抗CarP-IgG抗体阳性率和水平显著高于其他RA各组。
2、健康对照组和疾病各组抗CarP-IgM抗体阳性率和水平的比较：
与健康对照组相比，RA组（包括抗CCP抗体阳性RA组、抗CCP抗体阴性活动期RA组和抗CCP抗体阴性RA组）、关节痛组、其他自身免疫疾病组、SLE组患者血清抗 CarP-IgM 抗体阳性率和水平均显著升高，其余无显著差异。RA 组抗CarP-IgM抗体阳性率和水平显著高于骨关节炎组、干燥综合征组，与其余疾病组相比无显著差异。抗CCP抗体阴性活动期RA组患者血清抗CarP-IgM抗体水平均显著高于其他RA组，但阳性率仅与抗CCP抗体阴性稳定期RA组有统计学差异。
3、健康对照组和疾病各组抗CarP-IgA抗体阳性率和水平的比较：
与健康对照组相比，RA组（包括抗CCP抗体阴性RA组、抗CCP抗体阴性活动期RA组和抗CCP抗体阳性RA组）、关节痛组、其他自身免疫疾病组和干燥综合征组患者血清抗CarP-IgA抗体阳性率和水平均显著升高，其余无显著差异。RA组抗 CarP-IgA 抗体阳性率和水平显著高于骨关节炎组、干燥综合征组、未分化结缔组织病组和其他自身免疫疾病组，与其余疾病组相比无显著差异。抗 CCP 抗体阴性活动期RA组抗CarP-IgA抗体阳性率阳性率显著高于其他RA组，但水平仅与抗CCP抗体阳性RA组有统计学差异。
4、RA患者血清抗CarP抗体水平与疾病活动性指标的相关性：
抗CarP-IgG抗体水平与抗CCP抗体、RF、WBC计数间无明显相关性；与CRP水平和ESR均呈弱相关，r分别为0.15和0.25；与血清IgG水平呈中等相关，r为0.41。抗CarP-IgM抗体水平与抗CCP抗体、IgG水平和WBC计数间无明显相关性；与RF、CRP水平和ESR均呈弱相关，r分别为0.20、0.27、0.15。
抗CarP-IgA抗体水平与抗CCP抗体、WBC计数间无明显相关性，与RF、CRP、ESR和IgG水平均呈弱相关，r分别为0.18、0.17、0.18、0.17。
5、RA患者血清抗CarP抗体与DAS28评分的关系：
DAS28评分为疾病重度活动、中度活动的RA患者血清抗CarP-IgG抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体阳性率和水平均显著升高，高于疾病轻度活动和临床缓解患者，亦显著高于健康对照组。疾病中度活动患者抗 CarP-IgG 抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体阳性率和水平均高于临床缓解患者。
6、RA患者血清抗CarP抗体与影像学关节损伤的关系：
影像学（X线）骨和关节损伤Ⅳ期RA患者血清抗CarP-IgG抗体、抗CarP-IgM抗体和抗 CarP-IgA 抗体阳性率和水平均显著升高，高于Ⅰ和/或Ⅱ期。由于具有影像学资料的RA患者仅108例，每个分组的病例数较少，血清抗CarP抗体阳性的例数更少，使用连续连续校正 χ2检验，Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期间 RA 患者血清抗 CarP-IgG抗体、抗CarP-IgM抗体和抗CarP-IgA抗体阳性率和水平的比较部分无统计学差异。
7、血清抗CarP抗体单独和联合RF及/或抗CCP抗体对RA 的诊断效能：
以420例RA患者和120例健康对照及84例非自身免疫性疾病患者组成的对照组分析抗CarP抗体单独和联合RF及/或抗CCP抗体对RA 的诊断效能（表1~2）。
结论：
自建定量测定血清抗 CarP 抗体的微阵列化学发光免疫分析法具有较好的敏感性和特异性，精密度和线性范围等可初步满足临床检测的需求。RA 患者，尤其是疾病高度活动及影像学有明显骨质损伤患者血清抗 CarP 抗体水平和阳性率均显著升高，在 RA 患者血清抗 CarP 抗体水平与疾病活动性指标呈一定的相关性，提示血清抗 CarP 抗体可以作为 RA 疾病活动性和骨质损伤的辅助评价指标，具有较好的临床应用价值。在其他自身免疫性疾病中也存在一定比例的血清抗 CarP 抗体。血清抗CarP抗体对RA诊断的敏感性不高，但具有较高的特异性；如果和RF及抗CCP抗体联合检测，可以显著提高对RA的诊断性能。