【摘 要】
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目的:以期了解桥粒芯蛋白2（Desmoglein 2,DSG2）基因在宫颈癌Hela细胞DNA损伤后所参与的信号通路作用机制研究,从中筛选出与宫颈癌DNA损伤相关的分子学靶标,为宫颈癌临床诊断、治疗提供新的研究方向。方法:（1）利用免疫组化方法检测DSG2蛋白在宫颈癌与癌旁组织芯片中表达情况;（2）利用CRISPR/Cas9技术构建DSG2过表达、敲除的稳转宫颈癌Hela细胞系,并以DSG2空载组
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目的:以期了解桥粒芯蛋白2（Desmoglein 2,DSG2）基因在宫颈癌Hela细胞DNA损伤后所参与的信号通路作用机制研究,从中筛选出与宫颈癌DNA损伤相关的分子学靶标,为宫颈癌临床诊断、治疗提供新的研究方向。方法:（1）利用免疫组化方法检测DSG2蛋白在宫颈癌与癌旁组织芯片中表达情况;（2）利用CRISPR/Cas9技术构建DSG2过表达、敲除的稳转宫颈癌Hela细胞系,并以DSG2空载组作为对照。采用Western blot方法检测三组细胞系中DSG2蛋白表达情况;（3）DSG2过表达、敲除和空载三组Hela细胞系均通过依托泊苷诱导DNA损伤后进行转录组测序,从而获得差异表达基因。将差异基因进行GO富集、KEGG富集分析,得出相应注释结果;（4）利用STRING数据库和Cytoscape3.6.1软件绘制蛋白质-蛋白质相互作用（Protein-protein interaction,PPI）网络,从中找出关键基因。结果:（1）免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,DSG2在宫颈癌组织中表达水平显著增强（P＜0.05）;（2）通过CRISPR/Cas9构建DSG2过表达、敲除的Hela细胞系后,Western blot结果显示过表达的Hela细胞系中DSG2表达水平显著升高,而敲除的Hela细胞系中DSG2表达水平显著降低（P＜0.05）;（3）依托泊苷诱导空载Hela细胞（实验组）与加入二甲基亚砜（Dimethyl Sulfoxide,DMSO）空载Hela细胞（对照组）进行测序计算,依托泊苷诱导的空载Hela细胞共有960个差异基因,其中上调基因374个,下调基因586个。差异基因富集于KEGG数据库后,其富集最多的有p53信号通路、癌症相关信号通路等;（4）依托泊苷诱导DSG2过表达、敲除及空载Hela三种细胞系后分别进行测序分析。与空载Hela细胞系相比,DSG2过表达细胞系中共有6514个差异基因,其中3260个基因上调、3254个基因下调;与空载Hela细胞系相比,DSG2敲除细胞系中共有5444个差异基因,其中2828个基因上调、2616个基因下调;（5）在DSG2过表达、敲除的两组实验组中差异基因GO富集结果表明,差异基因在细胞组成功能上均可富集于intracellular part及intracellular,分子功能中均可富集于binding;KEGG结果表明差异基因主要富集于核糖体信号通路;（6）利用DSG2过表达组差异基因构建出一个可视化PPI网络。其中,RPS23、RPS19等10个上调hub基因和PSMB8、HLA-A等10个下调hub基因分别是网络的中心靶点。结论:（1）DSG2基因在宫颈癌中高表达,有可能成为宫颈癌潜在的肿瘤标志物;（2）通过KEGG及PPI分析表明,在依托泊苷诱导DGS2基因高表达细胞系时可能促进核糖体通路中RPS23、RPS19基因表达上调,从而参与肿瘤细胞DNA损伤。
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