【摘 要】
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目的:通过程序性深低温保存建立大鼠腹主动脉血管冷冻损伤模型,观察不同浓度附子多糖（Fuzi-polysaccharides,FPS）在冻存中对血管平滑肌细胞的保护作用,基于参与氧化应激损伤的线粒体为切入点,筛选出冻存保护血管的最佳浓度,探讨其发挥保护的作用机制。方法:采集36只SPF级SD大鼠的腹主动脉,将36根血管进行随机分为6组,各组6根血管,包括冻存干预组（FPS 0.1mg/m L组、FP
【基金项目】
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国家自然科学基金（基金课题 81960824）；
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目的:通过程序性深低温保存建立大鼠腹主动脉血管冷冻损伤模型,观察不同浓度附子多糖（Fuzi-polysaccharides,FPS）在冻存中对血管平滑肌细胞的保护作用,基于参与氧化应激损伤的线粒体为切入点,筛选出冻存保护血管的最佳浓度,探讨其发挥保护的作用机制。方法:采集36只SPF级SD大鼠的腹主动脉,将36根血管进行随机分为6组,各组6根血管,包括冻存干预组（FPS 0.1mg/m L组、FPS 1mg/m L组、FPS 10mg/m L组和FPS 20mg/m L组）、冻存模型组（灭菌注射用水组）和对照组（新鲜组）。冻存干预组和冻存模型组经程序降温,液氮保存1周,快速复温后得血管标本;对照组为解剖得新鲜血管标本。各组分别进行指标检测:用化学荧光法检测平滑肌细胞内活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量的变化;通过荧光标记检测线粒体通透性转换孔（Mitochondrial permeability transition pore,m PTP）的开放程度;用荧光分光光度计检测线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）变化情况,用荧光显微镜观察红绿荧光强弱;运用Flameng半定量分析法计分,对线粒体形态学损伤进行评分;经Elisa法检测各组线粒体内8-OHd G浓度的变化。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法,P＜0.05表示差异有统计学意义。结果:1、平滑肌细胞ROS的检测:与对照组相比,冻存干预组和冻存模型组的血管平滑肌细胞内ROS含量明显增多,差异具有统计学意义（P＜0.01）;与冻存模型组、FPS 0.1 mg/m L组、FPS 1mg/m L组相比,FPS 10 mg/m L组和FPS 20mg/m L组平滑肌细胞内ROS含量明显较低,差异具有统计学意义（P＜0.01）。FPS 10 mg/m L组和FPS 20mg/m L组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。2、m PTP开放程度检测:与对照组相比,冻存干预组和冻存模型组的血管平滑肌细胞m PTP开放程度明显增大,差异具有统计学意义（P＜0.01）;与冻存模型组、FPS0.1 mg/m L组、FPS 1mg/m L组相比,FPS 10mg/m L组和FPS 20mg/m L组平滑肌细胞mPTP开放程度减小,差异具有统计学意义（P＜0.01）。FPS 10mg/m L和FPS 20mg/m L组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。3、MMP检测:与对照组相比,冻存干预组和冻存模型组的血管平滑肌细胞线粒体膜电位明显减小,绿色荧光较强,红色荧光较弱,差异具有统计学意义（P＜0.01）;与冻存模型组、FPS 0.1 mg/m L组、FPS 1mg/m L组相比,FPS 10mg/m L组和FPS20mg/m L组平滑肌细胞线粒体膜电位较大,差异具有统计学意义（P＜0.01）。FPS10mg/m L组和FPS 20mg/m L组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。4、线粒体结构损伤指数计分:与对照组相比,冻存干预组和冻存模型组的血管平滑肌细胞线粒体半定量记分高,差异具有统计学意义（P＜0.01）。与冻存模型组、FPS0.1 mg/m L组、FPS 1mg/m L组相比,FPS 10mg/m L组和FPS 20mg/m L组平滑肌细胞线粒体半定量记分低,差异具有统计学意义（P＜0.01）。FPS 10mg/m L组和FPS20mg/m L组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。5、8-OHd G检测:与对照组相比,冻存干预组和冻存模型组的血管平滑肌细胞线粒体内8-OHd G含量明显增多,差异具有统计学意义（P＜0.01）。与冻存模型组、FPS0.1 mg/m L组、FPS 1mg/m L组相比,FPS 10mg/m L组和FPS 20mg/m L组平滑肌细胞线粒体内8-OHd G含量减少,差异具有统计学意义（P＜0.01）。FPS 10mg/m L组和FPS 20mg/m L组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1、当附子多糖浓度达10mg/m L时,对大鼠腹主动脉平滑肌细胞具有较佳的保护效果;2、适宜浓度的附子多糖可以通过抑制大鼠腹主动脉平滑肌细胞ROS的产生,减少大鼠主动脉平滑肌细胞氧化应激损伤;3、适宜浓度的附子多糖可以通过抑制平滑肌细胞m PTP的开放,减缓线粒体膜电位下降和mt DNA损伤,减轻冻存中线粒体氧化应激损伤。
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