白黄链霉菌TD-1固态菌剂制备及其应用研究

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近些年,由于我国农业长期过度地依赖化肥,导致土壤板结,土壤的微生态受到重创,其中大量的有益微生物菌群遭到破坏。微生物在正常的生长过程中能够释放次级代谢产物,增强植物的抗逆性,刺激作物根系的生长,降低作物产量损失。微生物菌剂内有特定的微生物可以通过其生命活动保证植物营养物质的供应,产生生长激素,抑制有害微生物的形成。因此,在土壤中施用优质的微生物菌剂,能够为解决当前农业上土壤生态质量和作物产量的问题提供新的方向。本论文以一株具有自主知识产权的白黄链霉菌TD-1为研究对象,首先进行液态发酵培养基和发酵条件单因素优化实验,筛选出有利于白黄链霉菌TD-1孢子扩繁的ISP4培养基,确定最佳液态培养条件为:培养时间为6 d、p H为6、培养温度30℃、接种量为10 m L/100 m L、装瓶量为100 m L/250 m L。采用响应面法对该培养基组分进行优化,以每克干基质中白黄链霉菌TD-1菌体质量为响应值,筛选出可溶性淀粉、氯化钠和氯化锰3个显著性因素,最佳发酵条件为可溶性淀粉0.8005 g、氯化钠1.2338 g和氯化锰0.1200 g,预测响应最大值为0.72 g/g干基质。在此发酵条件上进行验证试验,测得实际响应值为0.68 g/g干基质,与预测值相近,具有可行性。其次,通过对固态发酵基质和发酵条件进行优化制备白黄链霉菌TD-1固态菌剂,确定了最佳的白黄链霉菌TD-1菌剂固态发酵工艺:低值大米25 g、木薯粉1 g、棉籽饼粉2 g、麸皮2 g,含水量为30%(w/w),无机盐等因素添加量为K2HPO4为0.50%(m/v)、Mg SO4为0.30%(m/v)、Fe SO4为0.02%(m/v)、Na Cl为0.40%(m/v)、Mn Cl2为0.10%(m/v)、Co Cl2为15 mg/m L、几丁质1 g、p H为5,种子液接种量5 m L/30 g,30℃培养8 d。发酵结束后,根据国家《农药微生物菌剂》标准测得有效活菌数为10.67亿/g。为了提高白黄链霉菌TD-1固态菌剂的稳定性,论文中对一些助剂的添加工艺条件进行了优化,得出白黄链霉菌TD-1菌剂适宜助剂种类如下:载体为皂土、保护剂为腐殖酸、分散剂为PEG1000、润湿剂为皂角粉。经正交优化后得到助剂最佳组合为皂土30%(w/w)、腐殖酸1%(w/w)、PEG1000 2.5%(w/w)、皂角粉4%(w/w),与初始菌剂复配混合均匀即得白黄链霉菌TD-1菌剂最佳配方,测得其悬浮率为25.19%,润湿时间为149.35 s,质量有效活菌数为2.25亿/g。通过白黄链霉菌TD-1发酵液以及与其他微生物菌种复配得到液态发酵菌丝体,进行盆栽香葱苗的生长实验,可以得出施入白黄链霉菌TD-1菌丝体的处理组对香葱的植株高度起到了显著的促进生长效果,与对照组相比提高了21.21%,而添加了白黄链霉菌TD-1和枯草芽孢杆菌两种复合微生物的菌丝体的处理组的鲜重和干重达到了最大值,较对照组分别重了5.78 g和1.92 g。同时本论文初步探究发现在番茄植株叶片上喷洒白黄链霉菌TD-1发酵液对灰霉病具有一定的防治作用,经处理后的叶片上的病斑直径明显小于对照组叶片上病斑直径,防治效果可以达到63.49%。最后,盆栽实验表明,在土壤中施入3%(m/v)的白黄链霉菌TD-1固态菌剂能够在一定的程度上提高番茄叶片相关抗病防御激酶活性如PAL、POD和SOD的活力,分别为502.12 U、55.21 U和34.79 U。
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