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目的：构建IL-15基因与AFP158-166协同表达的慢病毒载体,包装afpIL-15基因表达慢病毒,体外感染肿瘤细胞,使之能够高效地表达IL-15,达到增强免疫效应同时提供AFP158-166抗原肽的目的。方法：(1)构建慢病毒afpIL-15基因表达载体：首先进行质粒双酶切,将IL-2spIL-15编码序列从慢病毒质粒CS-CDF-EF1-spIL15-PRE (LT15)上撤除,然后利用PCR技术,以质粒PHi2-afpIL15-CMV-TAT(LA-15)为模板扩增IL-2afpIL-15的编码基因,将其定向克隆于质粒CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE (LT15)中,构建质粒CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE (JA15)。(2)以含GFP表达质粒CS-CDF-EG-PRE(LO)为对照质粒,CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE (JA15)为表达质粒,利用脂质体介导的方法分别转染HCT116细胞、SW480细胞。(3)以CS-CDF-EG-PRE(LO)为对照质粒,CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE (JA15)为表达质粒,与其他三种辅助质粒pMDL/pRRE (L7)、 pRSV-Rev (L8)、pMD. G(L9)共转染293T细胞,包装含GFP、afpIL-15基因的两种慢病毒载体,感染BJAB细胞(4)利用倒置荧光显微镜观察细胞转染后绿色荧光的表达,流式细胞术(FCM)分析检测细胞的转染效率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞转染后24及48小时上清液中IL-15的浓度,分析IL-15基因的表达情况。结果：(1)质粒CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE (LT15)、pHi2-afpIL15-CMV-TAT (LA-15)、CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE (JA15)经限制性(单、双)酶切,PCR检测及测序分析,证实afpIL-15表达质粒构建成功。(2)质粒CS-CDF-EG-PRE(LO)和CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE (JA15)利用脂质体介导的方法均可转染HCT116细胞、SW480细胞,转染效率分别为10.1%及8.3%。(3)以CS-CDF-EG-PRE(LO)为对照质粒,CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE (JA15)为表达质粒,与其他三种辅助质粒pMDL/pRRE(L7)、pRSV-Rev (L8)、 pMD.G(L9)共转染293T细胞,成功包装了含GFP、afpIL-15基因的两种慢病毒,能有效感染BJAB细胞,验证了慢病毒载体的活性。(4)ELISA检测结果：PBS转染组及质粒CS-CDF-EG-PRE(LO)和GFP慢病毒转染肿瘤细胞后,均无IL-15的表达；质粒CS-CDF-EF_,-afpIL15-PRE(JA15)转染HCT116细胞24和48小时后上清液中IL-15的表达量为370.47±54.26pg/ml、400.13±56.41pg/ml,SW480细胞为464.15±95.27pg/ml、560.45±99.84pg/ml。afpIL-15慢病毒感染BJAB细胞后,IL-15能够高效地表达,表达量为9282.25±721.32pg/m1。结论：成功构建了慢病毒afpIL-15基因表达载体,运用脂质体介导的转染方法,将afpIL-15表达基因有效的导入肿瘤细胞,并可表达IL-15。成功制备了具有感染性的慢病毒,慢病毒感染肿瘤细胞后,IL-15能够高效地表达,为制备AFP特异性T淋巴细胞以及进一步的体内实验打下基础。