乳腺癌已经成为当今威胁女性健康的最常见恶性肿瘤之一,据美国癌症协会2014年发布的统计表明,乳腺癌的发病率和死亡率分别居于女性恶性肿瘤中的第一位和第二位。我国的流行病学统计数据显示,乳腺癌在我国不仅发病率和死亡率逐年增加,而且发病年龄也趋于年轻化。乳腺癌是一种高度异质性的肿瘤,无论在生物学行为、免疫表型、组织形态还是治疗反应上都存在着极大的差异。随着乳腺癌肿瘤分子生物学研究的进步,近年来,有研究者将乳腺癌再分为数个亚型,其中一种叫三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC),即激素受体(estrogen receptor, ER),孕激素受体(progesterone receptor, PR),和人表皮生长因子受体2(epidermal growth factor receptor2, HER-2/neu)均不表达,虽然三阴性乳腺癌的发病率较低,约占所有乳腺癌的10%.15%,但其侵袭性强、恶性程度高且预后差。由于缺乏相应受体表达,传统内分泌治疗及靶向药物赫赛汀疗效差。虽然有研究报道高达80%的三阴性乳腺癌中人表皮生长因子受体(EGFR)高表达,但是,令人遗憾的是,临床试验中,EGFR的靶向药物对三阴性乳腺癌患者未显示显著疗效,其内在机制亟需研究。Hippo信号通路是近年来首先在果蝇体内发现的一条细胞信号通路,该通路在进化过程中高度保守。它的主要功能包括调控器官体积、维持机体细胞增殖凋亡平衡,参与细胞接触性抑制的调节,通路的调控异常导致肿瘤发生。YAP(Yes-associated protein)和TAZ(transcriptional co-activator with PDZ-binding motif)是哺乳动物Hippo通路下游最主要的效应器,功能上,TAZ和YAP主要作为转录共激活因子和多功能的细胞内连接蛋白,参与细胞内信号转导和对其下游靶因子的转录共激活过程,促进或抑制细胞的增殖和凋亡,控制组织器官的正常体积及机体内环境的稳态。已有研究报道,TAZ能促进EGFR配体双调蛋白(AREG)的表达,从而使乳腺癌细胞MCF10A不依赖生长因子(EGF)增殖；YAP能够EGFR启动子结合,促进EGFR的表达,下调YAP能够提高食管癌细胞对氟尿嘧啶、多西紫杉醇的敏感性,提高卵巢癌细胞对EGFR抑制剂厄洛替尼的敏感性。目的：本课题旨在研究TAZ/YAP与人乳腺癌的关系,特别是与三阴性乳腺癌发生发展及EGFR靶向药物不敏感的关系,并初步探讨其内在机制。方法：采用Western blot和实时定量PCR技术,检测TAZ和YAP在4种人乳腺癌细胞系中的表达情况(MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-468,BT-549),选取TAZ高表达的细胞株进行研究。设计能干扰TAZ基因表达的短发夹RNA(shRNA),并构建慢病毒载体；对比细胞在TAZ下调前后对EGFR靶向抑制药物吉非替尼和AG-1478敏感性的变化。采用细胞体外增殖曲线、平板克隆以及流式细胞仪研究TAZ下调对细胞的增殖和凋亡的影响。利用小干扰RNA(siRNA)下调YAP基因表达,观察对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,利用RT-PCR和Western blot方法研究YAP下调后引起细胞凋亡的机制。结果：TAZ在三阴性乳腺癌细胞株的表达均高于激素受体阳性的MCF-7细胞；成功建立TAZ稳定下调的BT-549和MDA-MB-231细胞。下调TAZ后,BT-549细胞对吉非替尼和AG-1478的敏感性增加,但MDA-MB-231细胞却对吉非替尼和AG-1478的敏感性下降；下调TAZ后,BT-549细胞增殖抑制、凋亡增加,YAP表达无变化；而MDA-MB-231细胞呈现出增殖活跃、凋亡减少,YAP表达上调的现象,利用小干扰RNA再次抑制YAP后,MDA-MB-231细胞出现增值抑制、凋亡增加,恢复对吉非替尼和AG-1478的敏感性。提示下调TAZ对提高乳腺癌细胞的药物敏感性具有细胞特异性,对TAZ和YAP都表达的乳腺癌细胞需要同时抑制TAZ和YAP才能提高其对EGFR抑制剂的敏感性。下调人乳腺癌细胞系NDA-MB-231的YAP基因表达,导致细胞增殖抑制、凋亡增加,PTEN表达上调、AKT通路抑制、caspase3和PARP活化,凋亡相关基因表达增加,应用PTEN的特异性抑制剂bpv-Hopic后能够部分解救下调YAP导致的细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。提示YAP可能是通过PTEN-AKT通路来影响细胞增殖和凋亡的。结论：本研究首次发现下调TAZ/YAP能提高乳腺癌细胞对EGFR抑制剂的敏感性；首次提出在TAZ和YAP都表达的乳腺癌细胞系中,下调TAZ能够诱导YAP代偿性的表达上调。开发能够阻断TAZ和YAP的靶向性制剂,联合应用EGFR抑制剂,将会是TNBC的一个有效治疗手段。