【摘 要】
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目的:观察低频经皮神经电刺激（Transcutaneous electric nerve stimulation,TENS）对慢性缺血后疼痛（Chronic past-ischemia pain,CPIP）大鼠的镇痛效果,探讨背根神经节中P38 MAPK/TRPV1通路介导的外周敏化在低频TENS治疗CPIP大鼠疼痛中的机制。方法:将48只体重约为250g的3月龄雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对
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目的:观察低频经皮神经电刺激（Transcutaneous electric nerve stimulation,TENS）对慢性缺血后疼痛（Chronic past-ischemia pain,CPIP）大鼠的镇痛效果,探讨背根神经节中P38 MAPK/TRPV1通路介导的外周敏化在低频TENS治疗CPIP大鼠疼痛中的机制。方法:将48只体重约为250g的3月龄雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照组（Sham组）、慢性缺血后疼痛模型组（CPIP组）、慢性缺血后疼痛模型+低频经皮电刺激治疗组（TENS组）、慢性缺血后疼痛模型+低频经皮电刺激+茴香霉素鞘内注射组（An组）,每组12只。CPIP组、TENS组、An组均建立CPIP模型,即使用棉线捆绑麻醉大鼠后肢踝关节处,造成肢端缺血,3小时后剪断棉线,模拟下肢缺血后再灌注的过程,Sham组使用棉线不进行捆绑。TENS组、An组均行TENS治疗,治疗参数为频率2Hz,脉宽200μS,每次20分钟,每周干预5次,共干预10次。Sham组、CPIP组、TENS组在第1天干预后0.5h、1h、2h检测机械刺激缩足反应阈值（Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）和热刺激缩足反应潜伏期（Paw withdrawal thermal latency,PWTL）,各组于干预期间第 1、3、5、7、8、10、12天检测PWMT和PWTL;干预完成后取各组大鼠的L3-L5节背根神经节,用免疫荧光技术观察背根神经节（Dorsal root ganglion,DRG）中P-P38与神经元共定位关系;用Western blot技术检测IL-1β、P38、P-P38、TRPV1的蛋白表达水平。结果:1.PWMT检测:低频TENS能改善CPIP大鼠的PWMT。与Sham组相比,CPIP组大鼠的PWMT显著下降（P＜0.001）。TENS干预后,与CPIP组相比,TENS组大鼠的PWMT在0.5h时的缓解效果最为明显（P＜0.05）,随后TENS的治疗效果逐渐降低;实验期间,CPIP组大鼠的PWMT及其曲线下面积较Sham组显著下降（P＜0.001）;与CPIP组相比,TENS组的PWMT及其曲线下面积较CPIP组显著增加（P＜0.001）,An组PWMT及其曲线下面积较TENS组下降（P＜0.001）。2.PWTL检测:低频TENS能改善CPIP大鼠的PWTL。与Sham组相比,CPIP组大鼠的PWTL显著下降（P＜0.001）。TENS干预后,与CPIP组相比,大鼠的PWTL在1h时内均有缓解效果（P＜0.01）,随后TENS的治疗效果逐渐降低;实验期间,CPIP组大鼠的PWTL及其曲线下面积较Sham组显著下降（P＜0.01）;与CPIP组相比,TENS组的PWTL及其曲线下面积较CPIP组显著增加（P＜0.05）,An组PWTL曲线下面积较TENS组有所下降（P＜0.001）。3.蛋白表达水平:与Sham组相比,CPIP组P-P38、IL-1β、TRPV1的蛋白表达均显著增高（P＜0.01）;TENS组P-P38、IL-1β、TRPV1的蛋白表达水平较CPIP组显著下降（P＜0.05）;与TENS组相比,An组P-P38、IL-1β、TRPV1的蛋白表达水平有增加的趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）。4.免疫荧光检测:Neun标记的神经元与P-P38存在共表达情况;与Sham组相比,CPIP组Neun中P-P38的荧光强度增高（P＜0.001）;TENS 降低了 CPIP 组Neun 中 P-P38 的荧光强度（P＜0.001）;与 TENS组相比,An组Neun中P-P38的荧光强度增加（P＜0.01）。结论:低频TENS可能通过减少IL-1 β的表达,抑制神经元中P38的磷酸化,减少TRPV1的表达,拮抗外周敏化,从而缓解CPIP大鼠的痛觉过敏。
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