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目的:研究Nesfatin-1大鼠大脑中动脉缺血再灌注后(Middle cerebral artery occlusion rePerfusion MCAO/R)CAMKⅡ和PSD95蛋白表达的影响,探讨Nesfatin-1对大鼠脑缺血再灌注有部分保护作用,以及引起CAMKⅡ和PSD95蛋白表达的差异。方法:健康雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组(n=8),模型组:MCAO/R组(n=8),干预组:MCAO/R+Nesfatin-1 1μg/100g组(n=8),MCAO/R+Nesfatin-1 5μg/100g组(n=8),其他8只备用,良线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2小时再灌注24小时模型。10%的水合氯醛腹腔注射麻醉,待大鼠进入最佳麻醉状态(即翻正反射消失)后将大鼠固定于动物实验台,对大鼠颈部进行局部解剖手术,正常对照组仅分离右颈部颈总动脉,颈外动脉,颈内动脉,分离迷走神经,清创缝合皮肤;模型组在上述操作基础上,从颈外动脉插入线栓到颈内动脉,到达大脑中动脉,待缺血2小时后拔出线栓再灌注24小时;干预组大鼠脑缺血2小时,有行为学表现后拔出线栓,并于再灌注时分别腹腔注射Nesfatin-1 1μg/100g和Nesfatin-15μg/100g。操作完成,再灌注24小时后取出大鼠脑组织,进行TTC染色,拍照计算大鼠脑梗死面积,进行HE染色和免疫组织化学染色观察神经元细胞的形态学变化和免疫组化切片组织细胞中CAMKⅡ、PSD95的阳性表达,计算IHC切片的光密度值,取大鼠新鲜脑组织提取蛋白,应用WB蛋白印迹方法观察CAMKⅡ,PSD95的蛋白表达情况,用image-j和graPhPad软件分析蛋白条带的灰度值,制作统计图表。结果:1、光镜下HE染色结果显示:与正常对照组相比,MCAO/R模型组脑组织呈应激性损伤改变,脑组织疏松水肿,微血管及毛细血管扩张、充血,炎性细胞浸润,神经纤维肿胀;MCAO/R+Nesfatin-11μg/100g组与正常对照组相比,水肿情况稍有改善,但水肿脑组织依然清晰可见,MCAO/R+Nesfatin-1 5μg/100g察到水肿神经元及神经纤维,无组织坏死,崩解,无炎性细胞浸润。2、免疫组织化学法检测CAMKⅡ和PSD95蛋白表达结果显示:与正常对照组相比,模型组CAMKⅡ和PSD95在缺血再灌注后蛋白在细胞膜呈弱阳性表达;Nesfatin-1干预组和模型组相比,CAMKⅡ和PSD95在细胞膜呈阳性表达但低于正常对照组(P<0.05);CAMKⅡ和PSD95主要分布于细胞膜,细胞连接处,其中CAMKⅡ主要分布在突触前细胞膜,PSD95主要分布于突触后细胞膜;在缺血改变时,CAMKⅡ和PSD95的表达受到抑制,细胞膜阳性表达不明显。3、TTC染色结果显示:Nesfatin-1可以缩小大鼠脑组织的梗死范围,减轻脑组织水肿,正常对照组无脑组织梗死水肿改变,MCAO/R模型组右侧缺血再灌注部位脑组织染色呈现大面积白色,提示模型组大鼠右侧大脑组织出现梗死以及再灌注引起的应激性损伤;MCAO/R+Nesfatin-11μg/100g组缺血再灌注部位导致的梗死范围小于模型组但大于MCAO/R+Nesfatin-15μg/100g组。4、Western-Blot检测结果显示:MCAO/R模型组与正常对照组相比,CAMKⅡ和PSD95蛋白表达呈下调趋势(P<0.05),MCAO/R+Nesfatin-11μg/100g组相比较模型组,蛋白表达有一定的上调(P<0.05),MCAO/R+Nesfatin-15μg/100g组与模型组比较蛋白表达上调趋势更加明显(P<0.05)。结论:1、根据HE染色结果表明,大鼠脑缺血再灌注后会诱导相应区域脑组织的缺血性梗死以及再灌注导致的神经细胞和神经纤维应激性水肿,Nesfatin-1能够改善缺血再灌注神经元的神经水肿状态,并且随着剂量的增加,损伤程度会减轻;2、与空白对照组相比,模型组大鼠脑组织的海马和皮质部分CAMKⅡ和PSD95的蛋白表达呈弱阳性,干预组蛋白表达阳性程度低于空白对照组但高于模型组,3、CAMKⅡ和PSD95对缺血非常敏感,在缺血发生后,其表达量会降低,Nesfatin-1能够有效减轻缺血再灌注后大鼠脑组织神经细胞的凋亡、坏死、崩解、水肿,进而有效提升CAMKⅡ和PSD95的蛋白表达水平。