单核细胞增生李斯特氏菌是人畜共患病的病原菌。单增李斯特菌对环境具有非常强的耐受能力,在自然环境中单增李斯特分布非常广泛,可以引起各种疾病,虽然发病率低,但死亡率高(20%~30%)。为了掌握北京市市售食品中单增李斯特菌的分布、致病力及遗传多样性,本研究对北京市市售食品中的单增李斯特菌进行分离鉴定,并对分离菌株进行致病力相关因素研究、分型分析和比较基因组学分析。1.根据国标法对北京市市售食品进行单增李斯特菌分离、鉴定,以研究单增李斯特菌在食品中的分布;并应用多重PCR方法对菌株血清型进行鉴定。从470份食品样品中分离出71株单增李斯特菌,阳性率为4.0%(19/470)。其中生肉类制品的阳性率为13.4%(9/67)、即食加工食品阳性率为3.8%(9/237)、粮谷类制品阳性率为2.0%(1/49)、蔬菜水果未检出菌株(0/117)。这四类食品样品中,生肉制品更易被单增李斯特菌污染。分离菌株血清型为1/2a、1/2b和1/2c,其中1/2a血清型为优势血清型,血清型分布与食品样品种类没有必然联系。2.在单增李斯特菌的致病力影响因素研究中,分别对食品分离菌株的生物膜形成能力、抗生素敏感性、耐药基因和毒力基因进行了检测。(1)应用96孔板结晶紫染色法对食品分离菌株的生物膜形成能力进行检测,其中分离自生肉制品的4个菌株具有较强的生物膜形成能力。(2)应用肉汤微稀释药敏试验方法对食品分离菌株的氨苄西林、环丙沙星、红霉素、庆大霉素、呋喃妥因、青霉素G、利福平、四环素、复方新诺明和万古霉素的药物敏感性进行检测。分离菌株普遍对环丙沙星具有耐药性;对复方新诺明的耐药率达到68.4%;1株分离菌株对复方新诺明、环丙沙星和青霉素G呈三重耐药;34株菌株对复方新诺明和环丙沙星具呈双重抗性;22株菌株仅对环丙沙星耐药;分离菌株对氨苄西林、青霉素G、利福平、四环素和万古霉素均敏感或中介敏感。(3)应用PCR方法对食品分离菌株的20个抗生素耐药相关基因进行了检测,包括四环素耐药基因tet A、tet S、tet M,大环内酯类耐药基因erm B、erm C,氨基糖苷类耐药基因aac(6’)-Ib,β-内酰胺类耐药基因mec A,万古霉素耐药基因van A、van B,Tn916转座子切除酶Xis-Tn,Tn916转座子合成酶Int-Tn,多粘菌素耐药基因mcr-I,喹诺酮耐药决定区基因gyr A、gyr B、par C、par E,质粒介导的喹诺酮耐药决定区qnr A、qnr B、qnr S,甲氧苄氨嘧啶耐药基因dfr D。大部分耐药基因检测结果与药敏实验结果一致。(4)应用PCR方法对食品分离株进行了2个毒力岛的9种毒力基因进行检测,包括粘附与侵染基因inl A、inl B、inl C、inl J,胞内生长基因mpl、plc A、act A、hly,调控基因prf A。毒力基因检测结果均为阳性,说明北京市食品分离菌株的毒力基因缺失不严重,均有感染潜在能力。3.应用脉冲场凝胶电泳方法对食品分离菌株的遗传多样性进行分析。其中仅来自同一生产厂家的不同批次的烟熏三文鱼分离菌株的聚类相似度极高(95.7%~100.0%),说明该食品生产企业长期存在同一污染源;部分样品的分离菌株聚类相似度均相对较低,说明该食品样品的污染源菌种较复杂,或污染菌株来自不同污染源。4.应用Illumina公司的Hiseq Xten平台进行基因组测序,并对21个菌株的60个致病相关基因进行预测。其中全部菌株中均存在的为31个基因;部分菌株缺失的有3个基因;全部菌株中均未检出的为26个基因。菌株主要毒力因子缺失不严重,说明分离菌株具有一定致病力。通过16S r RNA序列对菌株进行进化分析,获得系统发育树。综上所述,本论文研究结果为北京市市售食品安全风险评估、相关疾病的控制和预防、指导临床治疗提供依据;为李斯特菌病暴发的溯源提供参考;同时,为单增李斯特菌生物学特征的研究提供数据支持。