【摘 要】
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目的:1.建立组织和脏器样本中砷（As）的电感耦合等离子质谱（ICP-MS）检测方法。2.建立砷中毒死后再分布和死后弥散动物模型。3.研究砷死后再分布规律,探讨其主要发生机制,为砷中毒意外致死案件的法医学鉴定提供实验室依据和参考。方法:1.样品前处理与检测1.1样品处理精密移取250μL血液或250mg组织或脏器样本于样本管中,分别加入65%的浓硝酸800μL和30%的过氧化氢200μL,密闭静置
【基金项目】
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国家自然科学基金资助（82130056,81172906）； 博士后科学基金（2019M651087）；
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目的:1.建立组织和脏器样本中砷（As）的电感耦合等离子质谱（ICP-MS）检测方法。2.建立砷中毒死后再分布和死后弥散动物模型。3.研究砷死后再分布规律,探讨其主要发生机制,为砷中毒意外致死案件的法医学鉴定提供实验室依据和参考。方法:1.样品前处理与检测1.1样品处理精密移取250μL血液或250mg组织或脏器样本于样本管中,分别加入65%的浓硝酸800μL和30%的过氧化氢200μL,密闭静置10分钟后,将样本管置于干式恒温器升温至90℃,消解180min。待消解完成后,使消解液降至室温,于通风橱内旋开瓶盖,用去离子水将消解液稀释至30m L,涡旋30s混匀,取3m L液体用0.22μm水系聚醚砜（PES）滤膜过滤,待测。1.2样本检测使用Agilent 7900电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）对样本进行检测。使用在线内标加入法,将混合内标通过内标管通入仪器,与样本液（1:20,V:V）同步引入仪器进行测定,用工作曲线定量。2.模型建立2.1死后再分布模型192只SD大鼠随机分为3组,每组以30mg/kg剂量给大鼠经口灌胃三氧化二砷水溶液,给药1h后处死,对照组经口灌胃等体积的去离子水,分别置于-20℃、4℃和室温条件下保存。于死后0、2、4、8、12、24、48和96h取心血、外周血、脑组织、心脏、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏和左下肢肌肉,-20℃冰箱保存待检。2.2死后弥散模型56只SD大鼠,随机分为7组,每组大鼠处死后,以30mg/kg剂量给大鼠经口灌胃三氧化二砷水溶液,置于室温下,仰卧位保存。分别于死后2、4、8、12、24、48和96h取心血、外周血、脑组织、心脏、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏和左下肢肌肉,-20℃冰箱保存待检。结果:1.砷的ICP-MS分析检测:大鼠生物检材中,血液砷浓度在0.0008～40μg/mL范围内呈线性关系,检出限和定量下限分别为0.00037μg/m L和0.0008μg/m L;脑组织、心脏、肺脏、肝脏和肾脏砷浓度在0.40～40μg/g范围内呈线性关系,检出限分别为0.02231、0.03523、0.02387、0.02049和0.01465μg/g,定量下限均为0.40μg/g;脾脏和肌肉砷浓度在0.16～40μg/g范围内呈线性关系,检出限分别为0.00224和0.00995μg/g,定量下限均为0.16μg/g。所有检材的线性相关系数（r）均大于0.999,日内和日间精密度均小于10%,提取回收率均大于90%,基质效应均在95%～105%范围内。2.死后再分布:通过对室温和4℃保存条件下砷中毒大鼠各检材中砷浓度的原始数据及C中央血/C外周血比值和Ct/C0比值的研究,证明砷中毒大鼠体内会发生死后再分布。室温保存条件下,受死后再分布影响最大的脏器是肺脏和肝脏,4℃时受影响最大的脏器为肺脏,各脏器砷浓度随保存时间的变化规律一致,但随着保存温度降低,砷发生死后再分布的现象将延缓。造成死后再分布的原因主要是肺脏的砷向肺血、心血和心脏的沉积以及胃的弥散作用。受到再分布影响的主要脏器为肺脏和肝脏,其次为肾脏、脾脏和心脏。脑组织和肌肉受死后再分布的影响较小。-20℃时,血液、组织和脏器基本不受死后再分布的影响。3.死后弥散:室温保存条件下,血液、组织和脏器中的砷浓度随着弥散时间逐渐升高,这种现象在肺脏和脾脏中较为明显,提示肺脏和脾脏受死后弥散的影响最大。肾脏、脑组织、心脏和心血的砷浓度在弥散48h后才有升高,受死后弥散影响较小。结论:1.建立了组织、脏器中砷浓度的ICP-MS检测方法,优点是处理单个样本所需的试剂量小,可一次性操作的样本数量大,仪器使用成本低,适用于大批量样本的处理。2.建立了砷中毒大鼠死后再分布模型,证明常温保存和4℃保存条件下,砷中毒大鼠会出现死后再分布现象,砷浓度随保存时间的改变规律基本一致,提示低温保存会减缓砷的死后再分布。受到再分布影响的主要脏器为肺脏和肝脏,其次为肾脏、脾脏和心脏。脑组织和肌肉受死后再分布的影响较小。-20℃时,血液、组织和脏器基本不受死后再分布的影响。3.建立死后弥散大鼠模型,室温保存条件下,死后弥散最主要的原因是胃蓄积库顺浓度梯度扩散,血液、组织和脏器中的砷浓度随着弥散时间逐渐升高,肺脏和脾脏中最为明显。肾脏、脑组织、心脏和心血的砷浓度受死后弥散影响较小。
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