【摘 要】
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已有研究成果表明黄连与吴茱萸炮制后发挥抗肿瘤作用的主要功效物质基础为生物碱类成分。本实验基于原发性肝癌模型大鼠体内外化学表征,探究萸黄连发挥抗肝癌作用的有效组分,为萸黄连有效组分抗肿瘤机制提供理论依据,对其进一步开发利用提供理论基础。采用Solt-Farber肝癌模型法建立Wistar大鼠肝癌模型,并通过苏木精-伊红（HE）染色法验证该模型;免疫组化法及酶联免疫法检测萸黄连和生黄连干预对肝癌模型大
【基金项目】
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黑龙江省研究生创新科研项目（YJSCX2014-322HSD）； 黑龙江省博士后基金资助项目（LBH-Z13121）； 哈尔滨商业大学科研启动基金资助项目（13DL024）；
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已有研究成果表明黄连与吴茱萸炮制后发挥抗肿瘤作用的主要功效物质基础为生物碱类成分。本实验基于原发性肝癌模型大鼠体内外化学表征,探究萸黄连发挥抗肝癌作用的有效组分,为萸黄连有效组分抗肿瘤机制提供理论依据,对其进一步开发利用提供理论基础。采用Solt-Farber肝癌模型法建立Wistar大鼠肝癌模型,并通过苏木精-伊红（HE）染色法验证该模型;免疫组化法及酶联免疫法检测萸黄连和生黄连干预对肝癌模型大鼠体内各项肿瘤相关生化指标的影响;采用轨道离子阱质谱法对萸黄连水煎液中的化学成分进行分析;采用UPLC/MS/MS技术检测萸黄连水煎液中生物碱类成分在正常大鼠及原发性肝癌大鼠体内的血浆药物浓度。HE染色法验证模型结果显示,模型组大鼠肝细胞排列松散,细胞核较大呈深蓝色,萸黄连干预模型组有病变减轻的趋势;免疫组化法测得Bcl-2阳性细胞在正常组、模型组、萸黄连干预模型组和生黄连干预模型组中的比例分别为:5.91±3.13%,50.25±10.36%,21.83±8.57%,20.06±7.41%;Bax 阳性阳性细胞的比例分别为:70.09±10.32%,21.31±5.12%,48.23±9.16%,44.25±7.69%;PCNA 阳性细胞的比例分别为:18.58±8.66%,55.61±9.81%,32.89±4.41%,28.46±4.01%,其中模型组与正常组相比有显著性差异,萸黄连干预模型组与模型组相比有显著性差异（P＜0.01）,表明萸黄连可以显著提高肝癌模型组Bax表达,降低Bcl-2及PCNA的表达。酶联免疫法检测正常组、模型组、萸黄连干预模型组和生黄连干预模型组大鼠血清中AFP含量分别为1.17±0.47,2.84±0.62,1.87±0.65,1.83±0.38ng/mL;AFP-L3 含量分别为 1.67±0.38,2.74±0.72,1.72±0.54,1.71±0.47ng/mL;GP73 含量分别为 1.78±0.53,4.18±0.75,2.52±0.71,2.85±0.61ng/mL;TK1 含量分别为 35.93±13.86,93.72±11.72,46.73±25.25,53.51±22.68ng/mL,其中模型组与正常组相比有显著性差异,萸黄连干预模型组与模型组相比有显著性差异（P＜0.01）,表明萸黄连能显著降低肝癌模型大鼠血清中AFP、AFP-L3、GP73、TK1等肿瘤标志物的含量。轨道离子阱色谱法分析萸黄连水煎液中的化学成分,结合现有文献资料,指认了萸黄连水煎液中的小檗碱、药根碱、巴马汀等27个可能存在的成分。建立的UPLC/MS/MS检测方法经验证可靠,检测结果显示大鼠血浆中小檗碱、巴马汀和药根碱三种生物碱成分含量最高,且均在60min时达到最大吸收,通过分析比较得到萸黄连有效组分比例为小檗碱:巴马汀:药根碱=4:2:1。综上所述,Solt-Farber法建立的原发性肝癌模型大鼠的肝脏确有癌变发生,萸黄连能有效抑制该模型大鼠体内肝癌细胞的增殖,具有抗肿瘤活性,其发挥抗肝癌作用的有效成分是小檗碱、巴马汀和药根碱,且三种成分在组分中的比例为4:2:1。
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