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血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）是体内重要的血管生长因子，促进内皮细胞分裂增殖和新血管的生成。VEGF165是VEGF家族中活性最强的因子，在内皮细胞相关的基础研究、信号途径、临床诊断等方面具有重要作用，因此如何对其进行准确快速的检测已经成为研究的重点。常用检测蛋白方法是以抗体为工具，因其本身的缺陷，限制了其应用。核酸适体为一段寡聚单链DNA或RNA分子，与抗体相比具有较高的特异性和亲和性，同时具有稳定性好、制备周期短、免疫原性小、靶分子范围广等优点，作为可替代抗体的适体，在科学研究、临床诊断和治疗中具有很好的前景。本文首先探讨了以适体替代抗体通过点杂交和Eastern blotting方法体外检测非还原状态和还原状态的VEGF165。并和以抗体做的结果进行比较。另外，本文还利用基于适体的局部保护原理(Aptamer-Based Regionally Protected PCR,ARP-PCR)，对VEGF165蛋白进行检测。适体与蛋白孵育结合后，加入DNase I将未与蛋白结合的适体酶切掉，由于蛋白的保护作用，与蛋白结合的适体区域免于酶切，免于酶切的适体被保护区域通过PCR扩增，以此检测蛋白的存在，最后对ARP-PCR方法进行特异性分析。利用点杂交和Eastern blotting分别对非还原蛋白和还原蛋白进行检测，点杂交的结果显示，设置的两个靶蛋白样品量（1.75μg、3.5μgVEGF165）有检测到阳性结果，说明抗体和适体的检测底限均为1.75μg且特异性良好；Eastern blotting的结果显示，抗体和适体的检测底限均为14μg且特异性良好。但Eastern blotting的灵敏性不如点杂交，可能是因为电泳和转膜操作中蛋白有一定量的损失导致。利用ARP-PCR方法对蛋白进行检测，为体现蛋白的保护作用，分别在加蛋白和未加蛋白的情况下做的。结果显示未加蛋白时，酶切0.5h-2h内，适体均被酶切掉；加蛋白的情况下，酶切0.5h、1.0h、1.5h时均有扩增条带，随着酶切时间的延长，扩增条带的亮度逐渐减弱。适体替代抗体的点杂交和Eastern blotting的结果显示适体具有与抗体相当的灵敏性和特异性，说明适体可以替代抗体进行蛋白检测。ARP-PCR方法中，蛋白具有保护适体免于酶切的作用，且酶切时间为0.5h，特异性良好。本方法可以快速的、简便的对蛋白进行检测，酶切时间仅仅0.5h，提高检测效率。