论文部分内容阅读
目的:以绿色荧光蛋白(EGFP)标记巨噬细胞的转基因斑马鱼炎症模型(Zlyz-EGFP)和用高通量筛选方法,通过观察巨噬细胞迁移、聚集,从296味中药(民族药)中筛选出抑制斑马鱼炎症的候选中药(民族药)。继而对所筛选出能抑制斑马鱼炎症的候选中药(民族药)进行大模式动物验证,为开发中药(民族药)抗炎药物提供实验基础。
方法:1、建立绿色荧光蛋白标记巨噬细胞的转基因斑马鱼(Z1yz-EGFP),通过分子克隆、显微注射、活体摄像和刀片切割尾部等方法,造出绿色荧光蛋白标记可示踪巨噬细胞的斑马鱼炎症模型。以地塞米松为对照,观察巨噬细胞向炎症部位迁移、聚集情况,用高通量方法,筛选出具有抗炎作用的候选中药(民族药)。2、以鸡蛋清致小鼠足肿胀、二甲苯致小鼠耳廓肿胀小鼠炎症为大模式动物模型,地塞米松为对照,通过比较其炎症部位肿胀度和肿胀抑制率验证斑马鱼实验所筛选的抗炎候选中药(民族药),并同时检测炎性因子IL-10、TNF-α浓度,以进--步证实其抗炎作用。
结果:1.在转基因斑马鱼急性炎症实验中3#、28#、35#药物均能在50mg/L、100mg/L的浓度下抑制巨噬细胞的迁移(P均<0.05)。并且三药在100mg/L的浓度下炎症部位的巨噬细胞数量均少于50mg/L浓度下巨噬细胞的量(P均<0.05)。且3#+28#、3+35#药物炎症部位的巨噬细胞量少于同浓度下任一单药炎症部位巨噬细胞的量。
2、在二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验中各组的小鼠耳廓肿胀度均明显低于空白对照组(P均<0.01),3#、28#、35#高剂量组肿胀度均明显低于其低剂量组,肿胀抑制率明显高于其低剂量组(P均<0.05)。各组中,3#+28#+35#组肿胀度最低,肿胀抑制率最高,明显好于3#+28#组、3#+35#组和28#+35#组(P均<0.05)。
3、在鸡蛋清致小鼠足趾肿胀实验中3#、28#、35#高剂量组在各个时间段足趾肿胀度均明显低于其低剂量组(P<0.05)。半小时、1小时、2小时、4小时时:3#+28#+35#组肿胀度、肿胀率明显低于其他组(P<0.05)。
4、在炎症因子的检测中:各用药组无论血清TNF-α或IL-10信号值均明显低于模型对照组(P均<0.01),以地塞米松组最低。3#、28#、35#其高剂量组无论TNF-α或IL-10信号值均低于其低剂量组(P均<0.05)。3#+28#+35#无论IL-10或TNF-α信号值均低于各两药相加组(P均<0.05)。
结论:1、成功构建了斑马鱼炎症疾病模型。
2、通过高通量筛选,发现3#、28#、35#中药具明显抑制斑马鱼巨噬细胞向其炎症部位迁移、聚集作用,并存在一定的剂量依赖关系和协同作用。
3、3#、28#及35#中药的抗炎作用在小鼠耳廓肿胀炎症模型、小鼠足趾肿胀炎症模型实验中得到进一步验证,且也存在协同作用,对炎症小鼠的IL-10和TNF-a浓度的检测结果也进一步支持了这一验证。
4、3#、28#及35#是具明显抗炎作用的候选中药(民族药),值得进一步开发。
方法:1、建立绿色荧光蛋白标记巨噬细胞的转基因斑马鱼(Z1yz-EGFP),通过分子克隆、显微注射、活体摄像和刀片切割尾部等方法,造出绿色荧光蛋白标记可示踪巨噬细胞的斑马鱼炎症模型。以地塞米松为对照,观察巨噬细胞向炎症部位迁移、聚集情况,用高通量方法,筛选出具有抗炎作用的候选中药(民族药)。2、以鸡蛋清致小鼠足肿胀、二甲苯致小鼠耳廓肿胀小鼠炎症为大模式动物模型,地塞米松为对照,通过比较其炎症部位肿胀度和肿胀抑制率验证斑马鱼实验所筛选的抗炎候选中药(民族药),并同时检测炎性因子IL-10、TNF-α浓度,以进--步证实其抗炎作用。
结果:1.在转基因斑马鱼急性炎症实验中3#、28#、35#药物均能在50mg/L、100mg/L的浓度下抑制巨噬细胞的迁移(P均<0.05)。并且三药在100mg/L的浓度下炎症部位的巨噬细胞数量均少于50mg/L浓度下巨噬细胞的量(P均<0.05)。且3#+28#、3+35#药物炎症部位的巨噬细胞量少于同浓度下任一单药炎症部位巨噬细胞的量。
2、在二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验中各组的小鼠耳廓肿胀度均明显低于空白对照组(P均<0.01),3#、28#、35#高剂量组肿胀度均明显低于其低剂量组,肿胀抑制率明显高于其低剂量组(P均<0.05)。各组中,3#+28#+35#组肿胀度最低,肿胀抑制率最高,明显好于3#+28#组、3#+35#组和28#+35#组(P均<0.05)。
3、在鸡蛋清致小鼠足趾肿胀实验中3#、28#、35#高剂量组在各个时间段足趾肿胀度均明显低于其低剂量组(P<0.05)。半小时、1小时、2小时、4小时时:3#+28#+35#组肿胀度、肿胀率明显低于其他组(P<0.05)。
4、在炎症因子的检测中:各用药组无论血清TNF-α或IL-10信号值均明显低于模型对照组(P均<0.01),以地塞米松组最低。3#、28#、35#其高剂量组无论TNF-α或IL-10信号值均低于其低剂量组(P均<0.05)。3#+28#+35#无论IL-10或TNF-α信号值均低于各两药相加组(P均<0.05)。
结论:1、成功构建了斑马鱼炎症疾病模型。
2、通过高通量筛选,发现3#、28#、35#中药具明显抑制斑马鱼巨噬细胞向其炎症部位迁移、聚集作用,并存在一定的剂量依赖关系和协同作用。
3、3#、28#及35#中药的抗炎作用在小鼠耳廓肿胀炎症模型、小鼠足趾肿胀炎症模型实验中得到进一步验证,且也存在协同作用,对炎症小鼠的IL-10和TNF-a浓度的检测结果也进一步支持了这一验证。
4、3#、28#及35#是具明显抗炎作用的候选中药(民族药),值得进一步开发。