【摘 要】
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目的:本实验采用人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞作为具体研究对象,探究Cur联合DDP针对ACC-M细胞侵袭能力以及相关蛋白MMP-2、CD44、E-cadherin表达产生的影响,并分析其抑制ACC-M细胞侵袭可能的分子机制,为腺样囊性癌侵袭及转移的防治提供新的治疗方案。方法:培养ACC-M细胞,将实验分为Cur组、DDP组、Cur联合DDP组（以下简称联合组）和对照组（含有0.1%DMSO的PB
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目的:本实验采用人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞作为具体研究对象,探究Cur联合DDP针对ACC-M细胞侵袭能力以及相关蛋白MMP-2、CD44、E-cadherin表达产生的影响,并分析其抑制ACC-M细胞侵袭可能的分子机制,为腺样囊性癌侵袭及转移的防治提供新的治疗方案。方法:培养ACC-M细胞,将实验分为Cur组、DDP组、Cur联合DDP组（以下简称联合组）和对照组（含有0.1%DMSO的PBS液）。（1）CCK-8实验:Cur浓度梯度设为（5μM、10μM、20μM、40μM）,DDP浓度梯度为（1μM、3μM、6μM）,运用SPSS 21.0软件计算出Cur及DDP处理ACC-M细胞12h、24h、36h的30%抑制浓度（30%inhibitive concentration,IC30）,联合组浓度（Cur IC30与DDP IC30联用）,分别检测各组作用于ACC-M细胞不同时间后增殖抑制情况,筛选低于IC30的Cur浓度20μM,DDP浓度3μM,联合组浓度（20μM Cur+3μM DDP）作为后续实验浓度。（2）Transwell体外侵袭实验:测定各组作用于ACC-M细胞24h后体外侵袭抑制情况。（3）RT-q PCR实验:针对各组作用于ACC-M细胞24h后的MMP-2、CD44以及E-cadherin m RNA表达水平进行测定。（4）Western blot实验:针对各组作用于ACC-M细胞24h后的MMP-2、CD44以及E-cadherin蛋白表达水平进行测定。结果:（1）Cur和DDP单药及联合用药对ACC-M细胞增殖的影响,在一定范围内不同浓度Cur和DDP作用ACC-M细胞不同时间后,ACC-M细胞增殖抑制率逐渐升高（P＜0.05）,Cur及DDP呈浓度及时间依赖性抑制ACC-M细胞增殖。Cur（20μM）与DDP（3μM）联用对ACC-M细胞增殖抑制上调幅度明显高于单药组。联合用药组和对照组及单药组对比而言,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（2）Cur和DDP单药及联合用药作用ACC-M细胞24h之后,联合组侵袭抑制率明显高于单药组及对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（3）RT-q PCR实验结果发现,Cur和DDP单药及联合作用ACC-M细胞24h之后,细胞中的MMP-2以及CD44 m RNA相对表达量呈现逐步降低趋势（P＜0.05）,E-cadherin m RNA相对表达量呈现出逐步上升趋势（P＜0.05）,同时联合强于单药。（4）Western blot实验结果显示,Cur与DDP单药以及联合作用于ACC-M细胞24h之后,细胞中的MMP-2以及CD44蛋白相对表达量呈现逐步降低趋势（P＜0.05）,E-cadherin蛋白相对表达量呈现出逐步上升趋势（P＜0.05）,同时联合强于单药。结论:（1）Cur和DDP单药及联合均能抑制ACC-M细胞的增殖,且在一定范围内,对ACC-M细胞的增殖抑制呈浓度及时间依赖性,且联合用药效果优于单药。（2）Cur和DDP单药及联合均能抑制ACC-M细胞的侵袭,且联合用药效果优于单药。（3）Cur联合DDP抑制ACC-M细胞侵袭的作用机制可能与MMP-2、CD44及E-cadherin蛋白表达水平改变相关。
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