【摘 要】
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羧酸酯酶2（Carboxylesterase 2,CES2）是人体肠道中重要的药物代谢酶,在许多前药的代谢激活和机体的脂质代谢中发挥重要作用。虽然研究CES2的方法众多,但CES2相关敲除动物模型未见报道。大鼠是药物代谢领域常用的模式动物,其肝脏和肠道中主要的Ces2亚型为Ces2a和Ces2c。本论文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,靶向大鼠Ces2a和Ces2c基因,创新性地构建了Ces
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羧酸酯酶2（Carboxylesterase 2,CES2）是人体肠道中重要的药物代谢酶,在许多前药的代谢激活和机体的脂质代谢中发挥重要作用。虽然研究CES2的方法众多,但CES2相关敲除动物模型未见报道。大鼠是药物代谢领域常用的模式动物,其肝脏和肠道中主要的Ces2亚型为Ces2a和Ces2c。本论文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,靶向大鼠Ces2a和Ces2c基因,创新性地构建了Ces2相关基因敲除大鼠模型。通过基因型鉴定并检测其潜在脱靶位点后最终得到了Ces2a/j、Ces2c和Ces2a/c/j基因敲除大鼠模型。上述基因敲除大鼠均能正常生长发育和繁殖。本论文在m RNA水平验证了Ces2a的表达缺失,并利用地尔硫卓作为底物验证了Ces2a代谢功能的缺失。本论文还利用已报道的Ces2底物伊立替康、阿司匹林和甲基泼尼松龙琥珀酸酯（MPHS）对Ces2a/j、Ces2c及Ces2a/c/j敲除大鼠的代谢功能进行了验证,结果显示所有敲除大鼠对MPHS的代谢能力均减弱,对伊立替康和阿司匹林的代谢能力未发生显著变化。为了确定Ces2a/j、Ces2c及Ces2a/c/j缺失后大鼠体内的代偿效应,本论文在m RNA水平检测了肝脏和小肠中主要Ces亚型的表达变化。此外,肝功能和血脂的检测结果显示,Ces2a/j或Ces2c缺失不会影响大鼠肝脏功能和结构,Ces2a/c/j缺失会引起肝脏中轻微的脂质空泡累积,并造成直接胆红素和胆汁酸水平的下调。综上所述,本论文成功构建了Ces2a/j、Ces2c及Ces2a/c/j基因敲除大鼠模型,该模型不仅可以作为Ces2相关的药物代谢研究的重要工具,还是研究Ces2生理功能的重要动物模型。
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