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彝药材小叶三点金（彝药名:（?）音译:就供补此）为豆科植物小叶三点金Desmodium microphyllum（Thunb.）DC 的全草;五花木通（彝药名:（?）音译:赤毕纽古）为豆科植物川滇羊蹄甲Bauhinia comosa Craib的干燥藤茎。小叶三点金和五花木通均为彝医临床经验方“彝药痛风颗粒”方中的药材,均为非标品种,“彝药痛风颗粒”的临床疗效确切,已获得国家发明专利保护,正在开展医疗机构制剂的研发。彝药材小叶三点金,味甘、性凉,清热利湿、止咳平喘和消肿解毒,主要用于治疗小儿疳积、黄疸、咳嗽、哮喘和痈疮溃烂等。彝药材五花木通,味苦、涩、性平,祛风除湿、活血、止痛和健脾理气,用于治疗风湿性关节炎、跌打损伤、咳嗽和大肠下血等。彝药材小叶三点金和五花木通,在我国西南少数民族地区使用历史悠久,临床疗效卓著。有关彝药材小叶三点金、五花木通的系统药材质量评价相关研究尚不明确,因此,药材质量评价和质量标准亟待研究,以期为彝医医疗机构制剂“彝药痛风颗粒”的研发提供科学依据。开展研究内容如下:1.研究方法1.1小叶三点金进行原植物、药材的性状、显微、薄层色谱和傅里叶红外光谱等鉴别研究;常规项检查（水分、总灰分以及酸不溶灰分）;浸出物含量测定;利用Box-Behnken响应面法优化小叶三点金总黄酮的提取方法及体外抗氧化活性研究,基于HPLC的荭草苷和异荭草苷等化学成分的含量测定,29种无机元素的测定,制定彝药材小叶三点金质量标准（草案）。1.2五花木通进行采用原植物、药材的性状、显微、薄层色谱和傅里叶红外光谱等鉴别研究;常规检查项检查（水分、总灰分及酸不溶灰分）;浸出物含量测定;采用Box-Behnken响应面法优化五花木通总黄酮的提取方法及总黄酮提取物的体外抗氧化活性研究,五花木通药材的指标性化学成分的分离与鉴定;基于HPLC的表儿茶素没食子酸酯为指标化学成分的含量测定,23种无机元素的测定,制定彝药材五花木通质量标准（草案）。2.研究结果2.1小叶三点金（1）鉴别研究1)实地采集花期和果期的原植物,完成了彝药材小叶三点金基原植物的定种以及药材性状的鉴别。2)采用傅里叶红外光谱法建立了彝药材小叶三点金的红外指纹图谱,10批不同产地的彝药材小叶三点金的共有峰率在36.36%～100%之间,最大变异率150%,结果显示不同产地样品之间有差异。（2）常规检查:依照《中国药典》“药材和饮片检定通则（通则0212）”,水分含量不得过13.0%、总灰分不得过14.0%、酸不溶灰分不得过8.0%。醇溶性浸出物含量不低于15.0%。（3）含量测定1)基于Box-Behnken响应面法优化总黄酮最佳提取方法:50%乙醇,料液比为1:50（g·mL-1）,加热回流提取时间为170min,加热回流温度为70℃。不同产地的小叶三点金样品中总黄酮含量有差异,最低含量13.71%（X4）、最高含量 20.04%（X1）。2)小叶三点金药材的总黄酮溶液浓度为0.8 mg·mL-1时对DPPH自由基的清除率为90%,与Vc的能力相当;相同质量浓度下,小叶三点金药材总黄酮溶液清除ABTS自由基的能力弱于Vc。彝药小叶三点金药材的总黄酮溶液可将（Fe3+）/铁氰化物络合物还原为亚铁形式（Fe2+）,具有较强的还原能力。3)采用HPLC法建立了小叶三点金药材的指标成分荭草苷（C21H20O11）和异荭草苷（C21H20O11）的含量测定方法,10批样品荭草苷测定结果在0.01%～0.14%之间,x-SD值为0.015%;异荭草苷测定结果在0.023%～0.480%之间,x-SD值为0.024%,荭草苷与异荭草苷的各自x-SD值后的总和为0.040%。综合不同批次结果,建议本品按干燥品计算,含荭草苷、含异荭草苷总量不低于0.04%。4)根据现行《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,重金属及有害元素规定范围为:铜（Cu）≤20.0 μg/g,汞（Hg）≤0.2μg/g、铅（Pb）≤5.0μ g/g、镉（Cd）≤0.3 μg/g、砷（As）≤2.0 μ g/g。在10批小叶三点金中,其重金属含量均未超出限度,表明在这10批小叶三点金中重金属含量符合规定。以10批不同产地小叶三点金的29个无机元素含量作为变量,采用瓦尔德聚类方法,以切比雪夫为度量标准进行系统聚类分析。结果显示,当聚类距离为20时,10批样品聚为三类,其中产自云南的X1、X2、X6、X8（凉山州螺髻山镇子热村5组）聚为一类;来自凉山州螺髻山产地的X5、X9、X10聚为一类;其余产地小叶三点金与聚一类。（4）建立彝药材小叶三点金的质量标准（草案）。2.2彝药材五花木通的药材质量标准研究（1）鉴别研究1)实地采集原植物,完成了彝药材五花木通的基原植物定种;建立了五花木通药材的性状鉴别特征。2)采用傅里叶红外光谱法,建立了五花木通药材的红外指纹图谱,并结合各产地的样品共有峰率、变异峰率双指标序列等对其分析,结果发现:10批不同产地的五花木通药材的共有峰率30.77%～100%之间,最大变异率在125%。结果显示不同产地样品之间差异。（2）常规检查:根据《中国药典》“药材和饮片检定通则（通则0212）”,水分含量不得过13.0%、总灰分不得过9.0%、酸不溶灰分不得过1.0%。醇溶性浸出物含量不低于28.0%。（3）指标性化学成分的分离与鉴定1)基于Box-Behnken响应面法优化总黄酮最佳提取方法:60%乙醇,料液比为1:30（g·mL-1）,加热回流提取时间为150min,加热回流温度为60℃。不同产地五花木通样品中总黄酮含量有差异,最低含量9.74%（W1）、最高含量16.58%（W4）。2)五花木通的总黄酮溶液质量浓度为0.40 mg·mL-1时,清除DPPH自由基的能力达到90%以上;五花木通总黄酮质量浓度为2.00 mg.mL-1时清除ABTS自由基的能力达到82%,均与Vc的能力相当。当总黄酮浓度达到0.40 mg·mL-1时,还原能力就达到最大0.3,而Vc在该浓度范围内都是0.6左右,五花木通的还原能力相对于Vc的还原能力较弱。五花木通总黄酮提取物对自由基清除效果明显,清除率与五花木通总黄酮含量在一定范围内呈量效关系,效果稍强于阳性对照药（L-抗坏血酸）;而在五花木通总黄酮的Fe+3还原能力测定中,其总体效果都低于阳性对照药（L-抗坏血酸）。3)对五花木通药材的甲醇提取液中的乙酸乙酯萃取部位,通过正相硅胶层析、制备液相、反相柱层析（ODS C18,40-60μm）,对30%、40%、50%、70%甲醇洗脱部位进行分离与纯化,最终得到6个单体化合物,采用ESI-MS（m/z）、1H/13CNMR、HSQC、HMBC、NOESY进行结构鉴定,获得1个化合物,鉴定为表儿茶素没食子酸酯。（4）含量测定采用HPLC法建立了五花木通药材的指标性化学成分表儿茶素没食子酸酯（C22H18010）的含量,10批样品表儿茶素没食子酸酯测定结果在0.026%～0.051%之间,x:0.041%,SD 值为 0.011%,x±30%范围为 0.028%～0.053%;综合不同批次结果,暂定为:含有表儿茶素没食子酸酯不得低于0.01%。在10批五花木通中,其重金属含量均未超出限度,表明在这10批五花木通中重金属含量符合规定。W-7中元素和其他批次差异最大,在W-7,W-2,W-3中无,机元素含量较其余批次较高,根据热图可看出,即使在同一地点,不同批次的五花木通无机元素含量也有较大差异,（5）建立彝药材五花木通的质量标准（草案）。