新疆阿勒泰羊与吐鲁番黑羊骨骼肌脂肪酸代谢相关基因的筛选

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本试验通过研究新疆地方绵羊品种吐鲁番黑羊与阿勒泰羊,首先检测其肌内脂肪及脂肪酸等指标,再应用Affymetrix?OvineGene1.0STArray(绵羊全基因组转录本基因表达检测芯片)技术,筛选出与吐鲁番黑羊和阿勒泰羊有关的脂肪酸代谢差异基因,随后克隆ACOX1(脂酰辅酶A氧化酶1)、ACSL1(长链脂酰CoA合成酶1)基因,并结合荧光定量PCR检测ACOX1、ACSL1、JAK2(Janus蛋白酪氨酸激酶)、PRKAA1(一磷酸腺苷激活蛋白激酶α1)、ACACB(乙酰辅酶A羧化酶B)基因在两品种各个肌肉组织中的表达差异,研究旨在发掘新疆地方绵羊特异的并能调控脂肪酸代谢的功能基因,从而获得准确的分子标记。试验结果如下:
  1.Affymetrix芯片分析结果共筛选出差异表达基185个,主要参与了脂肪细胞因子、脂肪酸降解等13个通路。经通路分析表明ACOX1基因参与脂肪酸降解通路,ACSL1、JAK2、PRKAA1和ACACB基因参与脂肪细胞因子信号通路。
  2.运用克隆测序方法分别获得阿勒泰羊ACOX1、ACSL1基因的全编码区序列1982bp和2099bp,最长开放阅读框分别为930bp和966bp,编码氨基酸310和322个,生物信息学分析表明阿勒泰羊ACOX1、ACSL1基因与牛的亲缘关系最近,基于分子功能及生物学途径预测表明ACOX1、ACSL1基因参与脂肪酸代谢过程。
  3.本研究对ACOX1、ACSL1、JAK2、PRKAA1、ACACB基因进行引物设计,采用荧光定量PCR验证基因的功能,结果发现,阿勒泰羊三个肌肉组织中ACOX1、ACSL1和ACACB基因的表达量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于吐鲁番黑羊。吐鲁番黑羊背最长肌ACSL1的表达量与油酸、亚麻酸表现为显著正相关(P<0.05);ACACB在吐鲁番黑羊臂三头肌的表达量与亚油酸、亚麻酸含量表现为极显著正相关(P<0.01)。油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸对人体健康有很大益处,推测ACSL1和ACACB基因对绵羊肉质及营养有调控作用。阿勒泰羊三个肌肉组织中JAK2、PRKAA1的表达量均低于吐鲁番黑羊,相关性分析表明,JAK2在两个品种不同肌肉的表达量均与肌内脂肪表现为负相关,PRKAA1在两品种不同肌肉的表达量均与肌内脂肪呈正相关,推测JAK2、PRKAA1对肌内脂肪的沉积及分解有潜在作用。
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