鲻鱼雌雄基因组DNA差异分析及性腺发育相关功能基因的克隆

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本研究利用RAPD和AFLP分子标记技术,对雌雄鲻鱼基因组DNA的差异性进行了探讨和分析,寻找其性别特异性DNA分子标记。同时利用PCR方法从性腺中克隆了两个与性腺发育相关的功能基因—P450芳香化酶基因和piwi相关基因的cDNA片段,为探讨其性腺分化发育的机制打下基础。首先利用400条RAPD随机引物对雌雄鲻鱼的基因组DNA进行初步筛选,得到了雌性特异序列S226和雄性性别特异序列S60。对这两条性别相关的差异序列进行验证后,认为它们不是与性别相关的具有稳定性和可遗传性的性别特异性探针。利用64对AFLP引物对雌雄鲻鱼的基因组DNA进行了差异性分析,得到了三条性别相关的序列:M5,M47,M47。但是经过进一步的验证后,排除了其为性别特异性探针的可能性。以鲻鱼卵巢cDNA为模板,用PCR的方法克隆得到了P450aromA的1543bp的cDNA序列,同时也克隆到了piwi相关基因的1237bp的cDNA序列。将P450aromA的cDNA序列进行翻译,可推导出434个氨基酸,并且cDNA序列含有236bp的3’非编码区,在poly(A)前18bp处存在AGTAAA加尾信号。鲻鱼piwi相关基因的cDNA序列可推导出412个氨基酸,利用DNAstar与人、小鼠、果蝇、线虫和斑马鱼的piwi的氨基酸序列进行同源性分析,发现鲻鱼PIWI与斑马鱼的PIWI的同源性最高,为75.5%;与人、小鼠、果蝇和线虫的同源性较低,在30.5%-58.8%之间。进化树分析也表明鲻鱼的piwi相关基因与斑马鱼的ziwi在进化上最相近。对于鲻鱼P450aromA和piwi相关基因在鲻鱼性腺发育过程的作用还有待进一步的研究和探讨。
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