微孢子虫是一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,具有广泛的宿主,包括无脊椎动物和脊椎动物。家蚕微孢子虫（Nosema bombycis,简称Nb）最早发现于1857年,是专性寄生于经济昆虫家蚕的病原微生物,它引起的微粒子病是蚕丝业的致命病害,而养蚕生产中,化学消毒一直是减少发生微粒子病的重要措施。因此研究蚕用常用化学消毒剂（漂白粉、二氧化氯、甲醛）杀灭（抑制）家蚕微孢子虫（Nb）的机理,对防治日益严峻的家蚕微粒子病有重要的现实意义,为漂白粉、二氧化氯、甲醛在蚕业生产和其他领域的开发利用提供理论基础。本文应用光镊拉曼光谱技术和相差显微成像实时监测漂白粉、二氧化氯、甲醛对Nb孢子的处理过程,以期从单细胞水平分析这些消毒剂对Nb孢子的杀灭机制。发芽是Nb孢子侵染的关键起始,抑制或者破坏了孢子的发芽也就阻断了Nb孢子的感染,因此本研究也监测了K2CO3—KHCO3法诱导的Nb孢子体外发芽,以了解其发芽机制。发芽过程显示:（1）发芽后孢内源自海藻糖的拉曼特征峰539、849、914cm-1,源自核酸的特征峰782cm-1,蛋白质的特征峰1658cm-1等同时迅速减弱或消失;（2）孢子极丝弹射时内部物质在极短时间内流出（小于1s）;（3）极丝开始弹射时,孢子亮度变化不明显,孢子极丝快速弹射后孢子快速变暗。次氯酸钙处理Nb孢子过程显示:（1）次氯酸钙处理引起Nb孢子破裂,孢内物质快速泄露,源自海藻糖的拉曼特征峰539、849、914cm-1等迅速减弱或消失,源自核酸的特征峰782cm-1,蛋白质的特征峰1658cm-1也同时减弱;（2）孢子开始破裂的时间和孢子间的异质性随着次氯酸钙浓度的升高而降低;（3）扫描电镜结果显示,处理后孢子破裂,孢内物质流出呈凹陷状,与拉曼光谱分析结果一致。ClO2处理Nb孢子过程显示,（1）ClO2处理后,Nb孢子内出现ClO2的拉曼峰,海藻糖的拉曼峰减弱并消失,而表征蛋白质α-螺旋的1658 cm-1峰明显减弱,表征无规则折叠的1668 cm-1峰则明显增强,1658 cm-1峰信号减弱与1668 cm-1峰的增强是同步的;（2）ClO2峰的出现和增强几乎都出现在海藻糖峰开始降低之前;（3）源自核酸物质的782 cm-1峰和苯丙氨酸的1004 cm-1峰的变化不显著;（4）ClO2同时破坏孢子壁的通透性,引起孢内海藻糖泄漏。甲醛处理Nb过程显示,2%（w/v）甲醛处理Nb孢子10 min、20 min、30 min、60 min后主要拉曼峰没有明显变化,处理后孢子不能发芽。因此,次氯酸钙处理Nb孢子引起孢子破裂,孢内海藻糖、核酸、蛋白质等物质快速释放,导致孢子死亡。ClO2分子能够极快透过Nb孢子壁,进入了孢子内部,造成孢内蛋白质的二级结构发生改变,相关蛋白可能因此失去功能。甲醛溶液能够有效杀灭Nb孢子,但是没有使孢子破裂内部海藻糖、核酸、蛋白质等大生物分子泄露,杀菌机理可能破坏孢子壁蛋白结构。基于光镊拉曼光谱的单细胞分析可以实时监测化学杀孢剂对Nb孢子的作用过程,但监测孢内物质微量变化的灵敏度较低。