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肌肉中肌内脂肪(IMF)含量与脂肪酸组成是决定肉类产品品质的重要因素,并与消费人群的健康息息相关。肌内脂肪细胞的脂质沉积受到遗传、营养、环境等多方面的影响,大量调控分子也对成脂相关基因的转录后调控发挥作用。Micro RNA(miRNA,miR)作为广泛存在于真核细胞中的调控分子,通过抑制靶基因的表达参与调控脂肪细胞的发育过程。已经有研究证明micro RNA-125a-5p(miR-125a-5p)在脂肪生成过程中扮演着重要角色。然而,还没有miRNA影响猪肌内脂肪细胞发育的分子机制相关的报道。本研究以猪肌内脂肪前体细胞作为实验材料,通过过表达与抑制miR-125a-5p在猪肌内脂肪前体细胞中的表达水平,验证miR-125a-5p在细胞增殖与分化中的功能,并通过靶基因预测和双荧光素酶报告系统,验证miR-125a-5p与KLF13和ELOVL6的靶标关系,同时检测转染miR-125a-5p mimics对猪肌内脂肪前体细胞脂肪酸组成的影响。主要研究结果如下:(1)猪肌肉组织中miR-125a-5p表达水平与肌内脂肪含量呈负相关,且在猪肌内脂肪前体细胞分化过程中miR-125a-5p表达水平存在显著变化。(2)对增殖过程中的猪肌内脂肪前体细胞,分别转染miR-125a-5p mimics,inhibitors和negative control发现,过表达miR-125a-5p使几个增殖相关基因的表达水平显著升高(p<0.05),并显著降低几个细胞周期蛋白阻滞因子通路相关基因的表达水平(p<0.05),而抑制miR-125a-5p得到了相反的结果;同样运用CCK8和Ed U试剂盒检测转染后细胞增殖情况,都证明了miR-125a-5p能够促进猪肌内脂肪细胞的增殖。(3)对分化过程中的猪肌内脂肪前体细胞,结合油红O染色和甘油三酯含量测定,我们发现过表达miR-125a-5p能够显著降低猪肌内脂肪细胞脂质的形成(p<0.05),而抑制miR-125a-5p能够显著促进脂质的形成(p<0.05)。再对几个成脂相关基因进行定量分析,发现过表达miR-125a-5p降低了C/EBPα,PPARγ,FABP4,FATP4,FASN的表达水平(p<0.05),而抑制miR-125a-5p的结果与过表达miR-125a-5p完全相反。证明miR-125a-5p能够降低猪肌内脂肪细胞的分化。(4)miR-125a-5p能够显著提高猪肌内脂肪前体细胞的线粒体含量。几个与线粒体生成相关基因(Tfam,Mterf1)以及线粒体能量代谢相关基因(Cox5b,TMEM70,Cox8b,Uqcr10,ATP6)的表达水平在过表达miR-125a-5p时显著升高(p<0.05),在抑制miR-125a-5p时则显著降低。(5)通过双荧光素酶报告系统验证了miR-125a-5p与KLF13和ELOVL6的靶标关系。说明miR-125a-5p是通过作用于KLF13和ELOVL6基因而发挥其调控作用的。(6)测定了转染miR-125a-5p mimics后,猪肌内脂肪前体细胞的脂肪酸组成,结果显示饱和脂肪酸(SFA)含量显著下降(p<0.05),同时单不饱和脂肪酸(MUFA)与饱和脂肪酸的比例显著上升(p<0.05),而多不饱和脂肪酸(PUFA)与饱和脂肪酸比值以及n-6(omega-6)脂肪酸与n-3(omega-3)脂肪酸比值差异不显著(p>0.05)。说明miR-125a-5p参与了对猪肌内脂肪前体细胞中脂肪酸组成的调控作用。