【摘 要】
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目的:观察结核分枝杆菌（Mtb）丝氨酸苏氨酸蛋白激酶G（PknG）对巨噬细胞M1型和M2型及其细胞因子的影响,探讨PknG对巨噬细胞极化的作用及其机制。方法:以菌株耻垢分枝杆菌（MS）为实验菌株,分为过表达PknG的MS（MS::PknG）组（PknG组）和空载菌株（MS::Vector）组（Vector组）,两组均以MOI=10刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7 0 h、12 h、24 h,应用
【基金项目】
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国家自然科学基金（项目批准号:82060010）；
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目的:观察结核分枝杆菌（Mtb）丝氨酸苏氨酸蛋白激酶G（PknG）对巨噬细胞M1型和M2型及其细胞因子的影响,探讨PknG对巨噬细胞极化的作用及其机制。方法:以菌株耻垢分枝杆菌（MS）为实验菌株,分为过表达PknG的MS（MS::PknG）组（PknG组）和空载菌株（MS::Vector）组（Vector组）,两组均以MOI=10刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7 0 h、12 h、24 h,应用流式细胞术检测巨噬细胞膜表面CD86和CD206分子的水平;q PCR检测刺激0 h、24 h、48 h后细胞裂解液i NOS、TNF-α、IL-6、IL-12、IL-1β及TGF-βm RNA的表达;ELISA检测刺激0 h、24 h、48h细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、TGF-β及IL-10的水平;Western blot检测刺激0 h、2 h、4 h细胞裂解液P65和P38蛋白磷酸化的表达,观察PknG干预对巨噬细胞极化的影响。结果:流式细胞术结果显示在PknG刺激RAW264.7细胞第12 h和24 h,与Vector组比较,PknG组M1型的巨噬细胞表面分子CD86水平升高（P＜0.01）;q PCR结果显示在刺激RAW264.7细胞第24 h,与Vector组比较,PknG组的M1型细胞因子IL-1βm RNA表达升高（P＜0.01）,M2型细胞因子TGF-βm RNA表达下降（P＜0.05）;刺激RAW264.7细胞第48 h,与Vector组比较,PknG组M1型细胞因子i NOS、TNF-α、IL-6、IL-12和IL-1βm RNA表达升高（P＜0.01）,M2型细胞因子TGF-βm RNA表达下降（P＜0.01）;ELISA结果显示在PknG刺激巨噬细胞RAW264.7第24 h,与Vector组比较,PknG组上清液M2型细胞因子IL-10和TGF-β的水平降低（P＜0.05）,Western blot结果显示MAPK信号通路中P38磷酸化无明显异常,P65的磷酸化明显增加。结论:PknG刺激可促进巨噬细胞向M1型转化,促进炎性细胞因子的产生,为结核分枝杆菌的致病机制提供一定的理论基础。
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