【摘 要】
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研究背景:牙周炎、衰老、外伤以及代谢性疾病等常造成牙槽骨吸收和骨组织缺损,可导致牙齿松动脱落且不利于各类义齿修复,对患者的咀嚼、发音和美观产生负面影响。目前常用的治疗方法仍具有一定局限性,如何促进骨缺损修复成为学者研究的热点。其中,将种子细胞与成骨活性药物相结合的干细胞疗法是一种具有吸引力的选择。牙周膜干细胞在一定条件下能向成骨细胞分化并具有较强的抗凋亡及增殖能力,是骨组织和牙周组织再生中优秀的种
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研究背景:牙周炎、衰老、外伤以及代谢性疾病等常造成牙槽骨吸收和骨组织缺损,可导致牙齿松动脱落且不利于各类义齿修复,对患者的咀嚼、发音和美观产生负面影响。目前常用的治疗方法仍具有一定局限性,如何促进骨缺损修复成为学者研究的热点。其中,将种子细胞与成骨活性药物相结合的干细胞疗法是一种具有吸引力的选择。牙周膜干细胞在一定条件下能向成骨细胞分化并具有较强的抗凋亡及增殖能力,是骨组织和牙周组织再生中优秀的种子细胞。研究发现,多种成骨活性药物能明显促进牙周膜干细胞成骨分化,促进骨组织形成。大麻二酚是植物大麻中最主要的一种非精神活性成分,具有抗氧化、抗炎等药理作用。最近研究表明,大麻二酚能有效促进前成骨细胞和间充质干细胞成骨分化,但大麻二酚对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的调节作用尚不明确。研究目的:本实验通过研究不同浓度大麻二酚对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的调节作用,以期为大麻二酚应用于骨组织和牙周组织再生提供理论依据。研究方法:1、采用组织块法分离培养人牙周膜干细胞,通过形态学观察、流式细胞术分析和多向分化实验进行细胞鉴定。2、将人牙周膜干细胞分为对照组、大麻二酚组（浓度分别为0.1,0.5,2.5,12.5μmol/L）,分别作用1,3,5,7 d后,通过CCK-8法检测各组细胞增殖能力。3、将人牙周膜干细胞分为对照组、大麻二酚组（浓度分别为0.1,0.5,2.5μmol/L）,通过测定碱性磷酸酶活性、茜素红S染色及半定量分析,检测各组细胞成骨分化能力。4、将人牙周膜干细胞分为对照组、大麻二酚组（浓度分别为0.1,0.5,2.5μmol/L）,通过q PCR检测不同浓度大麻二酚对人牙周膜干细胞成骨相关基因COL1、OCN、RUNX2和β-catenin表达的影响。研究结果:1、采用组织块法分离培养的人牙周膜干细胞为长梭形,呈漩涡状生长,阳性表达间充质干细胞特异性标志物CD73、CD90和CD105,阴性表达CD34和CD45,具有成骨分化和成脂分化的多向分化能力。2、与对照组相比,前5天0.1-12.5μmol/L大麻二酚对人牙周膜干细胞增殖均无明显影响;在第7天,0.1μmol/L大麻二酚对人牙周膜干细胞活力无明显影响,0.5,2.5μmol/L大麻二酚显著促进其增殖,而12.5μmol/L大麻二酚有明显细胞毒性。3、与对照组相比,0.1-2.5μmol/L大麻二酚显著增强人牙周膜干细胞的碱性磷酸酶活性和矿物沉积,其促进作用随浓度增高而增强。4、与对照组相比,0.1-2.5μmol/L大麻二酚可明显上调细胞内成骨相关基因COL1、OCN、RUNX2和β-catenin表达。研究结论:1、大麻二酚以浓度和时间依赖性方式调节人牙周膜干细胞增殖,其中2.5μmol/L促进效果最为显著,12.5μmol/L具有细胞毒性。2、大麻二酚以浓度依赖性方式促进人牙周膜干细胞成骨分化,其中2.5μmol/L效果最为显著。
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